瑞舒伐他汀對(duì)UUO大鼠模型LPA1受體、RhoA、CTGF及Ⅲ型膠原表達(dá)的影響.pdf

1、目的:腎間質(zhì)纖維化是慢性腎臟病(Chronic Kidney Disease，CKD)的最終表現(xiàn)，使慢性腎臟病不可避免的進(jìn)展至終末期腎病(End StageRenal Disease，ESRD)，其治療包括血液凈化和腎移植治療。腎間質(zhì)纖維化以腎小管間質(zhì)纖維化和腎小球硬化為主要表現(xiàn)，分子學(xué)機(jī)制表現(xiàn)為:細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積(Extracellular Matrix，ECM)，而病理學(xué)則往往表現(xiàn)為細(xì)胞的激活，例如:上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化、纖維母

2、細(xì)胞、纖維細(xì)胞、肌成纖維細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞的浸潤等;細(xì)胞凋亡和信號(hào)分子的激活，例如:轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、血管緊張素-Ⅱ等。3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMG-CoA reductase）作為膽固醇合成過程中的限速酶，在膽固醇合成過程中起關(guān)鍵作用，其抑制劑即他汀類藥物是治療血脂異常的經(jīng)典藥物。他汀類藥物普遍應(yīng)用于心腦血管疾病，但是它的多效性還體現(xiàn)在抗炎癥細(xì)胞浸潤、抗氧化應(yīng)激、減輕細(xì)胞外基質(zhì)沉積等，具有腎臟保護(hù)作用。有關(guān)研究顯示:

3、腎間質(zhì)纖維化過程中溶血磷脂酸受體-1(LysophosphatidicAcid Receptor-1，LPA1R)表達(dá)增加，從而誘導(dǎo)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(Connective Tissue Growth Factor，CTGF)和Ⅲ型膠原(Collagen TypeⅢ)的表達(dá)增加，此過程通過多種信號(hào)通路來調(diào)節(jié)，是否通過小G蛋白R(shí)hoA來調(diào)控研究尚少，他汀類藥物可通過其異戊二烯化作用降低RhoA蛋白的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菙M通過瑞舒伐他汀的干預(yù)，

4、觀察其對(duì)LPA1受體、RhoA、CTGF及Ⅲ型膠原在單側(cè)輸尿管梗阻模型所致的腎間質(zhì)纖維化大鼠中表達(dá)的影響，研究LPA1受體是否是通過小G蛋白R(shí)hoA進(jìn)行調(diào)控，探討瑞舒伐他汀減輕、延緩腎間質(zhì)纖維化，腎臟保護(hù)作用的可能機(jī)制，為延緩慢性腎臟病的進(jìn)展提供新的治療靶點(diǎn)。
　　方法:將54只SPF級(jí)雄性SD大鼠(體重180g±20g)編號(hào)后按照隨機(jī)原則分為三組:正常對(duì)照組(A組)18只，模型組（單側(cè)輸尿管結(jié)扎組，B組）18只，治療組（瑞舒伐他

5、汀干預(yù)組，C組）18只。適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后建立單側(cè)輸尿管梗阻模型，各組大鼠于術(shù)前12小時(shí)開始禁食水。手術(shù)過程如下:每組大鼠均以10％水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射+2％鹽酸利多卡因皮下浸潤麻醉。備皮消毒鋪單后，觸診腎臟，給予左側(cè)腹部縱形切口，逐層分離組織層及肌肉層，暴露左腎，并沿左腎下極找到左輸尿管，在輸尿管中上1/3處用4-0號(hào)線上下結(jié)扎并從中剪斷輸尿管，以防逆行性感染，逐層縫合至皮膚。A組大鼠除不結(jié)扎和剪斷輸尿管外，其他手術(shù)

6、過程與其余兩組相同。C組給予瑞舒伐他汀混懸液10mg/(Kg·d)灌胃;對(duì)照組及模型組每日給予等容積的0.9％氯化鈉注射液灌胃;三組大鼠均于造模前1天開始灌胃。單側(cè)輸尿管梗阻（unilateral ureteral occlusion，UUO）術(shù)后分別于3、7、14天取6只大鼠處死，留取左腎標(biāo)本置于4％多聚甲醛固定液中固定并編號(hào)，經(jīng)梯度酒精逐級(jí)脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制成3um切片，烘干，然后用HE、Masson染色法染色后，于光鏡

7、下觀察大鼠腎臟組織病理改變及腎間質(zhì)纖維化程度;應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)LPA1受體、RhoA、CTGF及Ⅲ型膠原在腎臟中的表達(dá)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行半定量分析。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±S）表示統(tǒng)計(jì)結(jié)果，應(yīng)用單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，P＜0.05表示結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察
　　光鏡下HE染色:A組，腎小球和腎小管及間質(zhì)未見明顯異常;B組，

8、術(shù)后第3天，可觀察到少量炎癥細(xì)胞在腎間質(zhì)局部浸潤，腎小管有輕度擴(kuò)張;第7天，可觀察到大量炎癥細(xì)胞浸潤于腎間質(zhì)區(qū)域，腎間質(zhì)寬度明顯增加，腎小管明顯擴(kuò)張，上皮細(xì)胞變性、壞死;第14天，可見較多腎小管萎縮，腎小管基底膜有彌漫性增厚、皺縮;C組，術(shù)后腎小管間質(zhì)病變隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)進(jìn)行性加重，和同時(shí)相B組相比，病變程度有所減輕，但仍明顯重于A組。
　　光鏡下Masson染色:A組，未見明顯異常;B組，術(shù)后第3天可觀察到腎小管輕度擴(kuò)張，腎間質(zhì)區(qū)

9、域可見少量藍(lán)色膠原纖維沉積，與A組相比有所增加;術(shù)后第7天及第14天，腎小管擴(kuò)張程度進(jìn)行性加重，膠原纖維沉積顯著增多，間質(zhì)纖維化現(xiàn)象明顯;C組，術(shù)后腎小管擴(kuò)張程度、膠原纖維表達(dá)水平隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)進(jìn)行性加重、增多，雖較同時(shí)相B組的病變程度稍輕，但仍明顯重于A組。
　　2腎組織中LPA1受體、RhoA、CTGF及Col-Ⅲ免疫組織化學(xué)染色
　　LPA1受體:A組，腎小管上皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞微量表達(dá);B組，腎小管上皮細(xì)胞及腎間質(zhì)大量

10、表達(dá)，且隨梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)量增加，較同時(shí)相A組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＜0.05）;C組，腎小管上皮細(xì)胞及腎間質(zhì)大量表達(dá)，隨梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)進(jìn)行性加重，較同時(shí)相A組表達(dá)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＜0.05），但B、C兩組間表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05）。
　　RhoA:A組，腎小管上皮細(xì)胞輕微表達(dá)，為基礎(chǔ)水平的表達(dá)，腎小球無明顯表達(dá);B組，隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，腎小管上皮細(xì)胞及腎間質(zhì)表達(dá)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＜0.05），較A組同時(shí)相

11、表達(dá)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＜0.05）;C組，隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)增加，術(shù)后3、7、14天相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＜0.05），與同時(shí)相B組相比術(shù)后3天和術(shù)后7天無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，較術(shù)后14天有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，較同時(shí)相A組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＜0.05）。
　　CTGF:A組，腎小球無明顯表達(dá)，在腎小管上皮細(xì)胞輕微表達(dá);B組，術(shù)后3、7、14天較A組同時(shí)相表達(dá)均增加（P均＜0.05），術(shù)后7天較術(shù)后3天表達(dá)增

12、加有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，術(shù)后14天表達(dá)進(jìn)一步增加(P＜0.05);C組，隨梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，其表達(dá)增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0.05)，與同時(shí)相B組相比表達(dá)下降，與A組相比表達(dá)增加（P均＜0.05）。
　　Col-Ⅲ:A組，腎小管上皮細(xì)胞輕微表達(dá)，為基礎(chǔ)水平的表達(dá)，腎小球無明顯表達(dá);B組，隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，腎小管上皮細(xì)胞及腎間質(zhì)表達(dá)增加，但術(shù)后3天及術(shù)后7天表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，較術(shù)后14天分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P

13、均＜0.05），較A組同時(shí)相表達(dá)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＜0.05）;C組，隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)增加，但術(shù)后3天和術(shù)后7天無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，分別較術(shù)后14天有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0.05)，較同時(shí)相A組和B組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＜0.05）。
　　結(jié)論:LPA1受體、RhoA、CTGF和Col-Ⅲ在梗阻側(cè)腎臟表達(dá)增加，且具有時(shí)間依賴性。瑞舒伐他汀通過下調(diào)RhoA的表達(dá)，減輕CTGF和Ⅲ型膠原在腎臟的表達(dá)，從而可能起到延緩