雌激素受體β在大鼠骨髓基質干細胞成骨與成脂肪分化平衡中的作用.pdf

1、骨的生理性改建是口腔正畸牙齒移動的基礎，因而骨的生長與代謝直接或間接地影響正畸的療效。口腔正畸過程中牙齒在骨組織中的移動主要是通過骨的形成和吸收來完成的。雌激素作為調控骨改建的重要條件之一是通過雌激素受體完成的，然而雌激素受體β是否參與介導骨髓間充質干細胞的增殖與分化，至今仍有待于進一步的實驗論證。
　　本研究采用siRNA技特異性術對雌激素受體β進行干涉，并穩(wěn)定轉染入分離培養(yǎng)的骨髓基質干細胞中，觀察其在成骨和成脂肪分化平衡的作用

2、。
　　研究內容如下：
　　1．SiRNAERβ特異性表達載體的構建與鑒定
　　根據(jù)siRNA的設計原則，以ERβ基因的RNA序列為靶序列，實驗設計了三對特異性siRNA干擾序列，經(jīng)DNA測序，結果顯示所插入序列與合成序列完全相同，證明載體構建正確。
　　2．不同年齡骨髓間充質干細胞成骨與成脂分化平衡的研究
　　采用全骨髓自然貼壁篩選法從不同年齡的雌性SD大鼠股骨中分離、純化培養(yǎng)出BMSCs，并通過倒置顯微

3、鏡觀察、MTT細胞生長曲線等生物學行為觀察，初步判斷其活力和均一性。再經(jīng)成骨、成脂等多向分化誘導，獲得了茜素紅染色的類成骨細胞和油紅-O染色的類脂肪細胞。采用圖像分析軟件進行分析，計算出礦化率和成脂率。
　　結果表明隨著年齡的增加成骨能力減弱而成脂肪能力增強。骨髓中的脂肪細胞增多可能是促成增齡性疾病－骨質疏松的原因。
　　3．雌激素受體β與大鼠骨髓基質干細胞成脂肪分化相關性研究
　　通過對大鼠骨髓基質干細胞成脂肪分化過

4、程中雌激素受體β表達規(guī)律的研究，進一步明確雌激素受體β與骨代謝的的相關性。大鼠骨髓基質干細胞培養(yǎng)，成骨誘導分化，鈣染色。成脂肪誘導分化，油紅O染色。Westernblot方法測定大鼠骨髓基質干細胞成脂肪分化過程中雌激素受體β的表達。全骨髓貼壁的方法培養(yǎng)獲得大鼠骨髓基質干細胞。成脂誘導分化顯微鏡下脂肪滴、油紅O染色陽性細胞隨成脂肪時間增加而增多。雌激素受體β的表達隨成脂時間的增加而遞增。大鼠骨髓基質干細胞成脂肪分化過程中ERβ的表達隨時間

5、逐漸增加。
　　4.ER-β特異性siRNA對rBMSC成骨與成脂肪分化影響的研究
　　轉染siRNAER-β骨髓基質干細胞在雌激素條件下進行成骨誘導分化，應用試劑盒檢測堿性磷酸酶活性和茜素紅方法染色鈣化結節(jié)，而成脂肪誘導分化后也應用Pt－PCR技術檢測脂蛋白脂肪酶含量和油紅－O方法染色脂肪顆粒。結果顯示雌激素受體β干涉后的骨髓基質干細胞誘導成骨后堿性磷酸酶活性增強鈣化結節(jié)也見增多，而誘導成脂肪后LPLmRNA表達量顯著降低