去甲腎上腺素在急性冬眠心肌中的釋放和作用.pdf

1、目的：冬眠心肌是缺血性心肌病再灌注治療后心功能恢復(fù)的主要組成部分，再灌注前維持冬眠心肌的存在對于心肌的存活和再灌注后心功能的恢復(fù)都是非常重要的。目前認(rèn)為，心肌冬眠是以心臟對心肌的缺血適應(yīng)為特征的一種內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，然而，觸發(fā)和維持心肌冬眠的機(jī)制仍不清楚。去甲腎上腺素在心肌缺血過程中起了重要的作用，而它在心肌冬眠中的作用尚未明確。本實(shí)驗(yàn)擬采用離體鼠心急性冬眠模型，對急性心肌冬眠時心臟去甲腎上腺素的釋放和去甲腎上腺素在急性心肌冬眠形成中的作

2、用進(jìn)行探討。 結(jié)論：1、此模型符合急性心肌冬眠的特征，提示大鼠離體心臟的急性冬眠模型被成功建立。2、離體鼠心急性冬眠時不伴有心臟去甲腎上腺素自發(fā)性釋放的明顯增加，電場刺激引起的心臟去甲腎上腺素的釋放明顯減少，再灌注30分鐘時電場刺激引起的心臟去甲腎上腺素的釋放完全恢復(fù)，提示在急性心肌冬眠的形成過程中，心臟的交感神經(jīng)可能也經(jīng)歷了一個冬眠的過程，再灌注治療可能有利于心臟交感神經(jīng)功能的恢復(fù)。3、外源性的去甲腎上腺素可以引起心功能進(jìn)行性

3、的降低，這可能與冠脈流量的降低、心肌細(xì)胞的壞死和凋亡有關(guān)，提示外源性的去甲腎上腺素可能是加速冬眠心肌結(jié)構(gòu)和功能惡化的一個重要因素，而心臟本身的去甲腎上腺素可能并沒有參與急性心肌冬眠的形成。 第一部分離體鼠心急性冬眠模型的建立 目的：建立離體鼠心急性冬眠模型，以便對急性心肌冬眠進(jìn)行進(jìn)一步的研究。方法：建立大鼠離體心臟等容收縮Langendorf灌注模型，以95％O2-5％CO2飽和的改良Krebs-Henseleit液經(jīng)主

4、動脈逆行灌注心臟，觀察低灌120分鐘復(fù)灌30分鐘過程中壓力心率乘積、冠脈流量、乳酸脫氫酶的漏出和心肌超微結(jié)構(gòu)的改變，并觀察了缺血時心肌對多巴酚丁胺的反應(yīng)。結(jié)果：灌注壓力由90cmH2O降至15cmH2O后，以左心室壓力心率乘積表示的心臟機(jī)械功能、冠脈流量和乳酸脫氫酶的漏出迅速降至低灌注前水平的8.5％、12.2％和23.7％，在隨后120分鐘的低灌中，以上指標(biāo)沒有進(jìn)一步顯著的降低或升高，復(fù)灌后冠脈流量和壓力心率乘積迅速升高至低灌前水平；

5、心肌的超微結(jié)構(gòu)未出現(xiàn)明顯的改變；缺血心肌保持對多巴酚丁胺的正性肌力反應(yīng)。結(jié)論：此模型符合急性心肌冬眠的特征，提示大鼠離體心臟急性冬眠模型被成功建立。 第二部分離體鼠心急性冬眠時心臟去甲腎上腺素的釋放 目的：探討急性心肌冬眠時心臟去甲腎上腺素的釋放。方法：選擇健康雄性SD大鼠36只，隨機(jī)分成6組，即對照組、冬眠組、冬眠-酪胺組、復(fù)灌組、酪胺組和去甲丙咪嗪酪胺組，每組6只，采用大鼠離體心臟Langendorf灌流模型，建立離

6、體鼠心急性冬眠模型。用高效液相色譜法測定急性心肌冬眠時心臟去甲腎上腺素的自發(fā)性和電場刺激引起的釋放，并評價去甲丙咪嗪和酪胺對去甲腎上腺素釋放的影響及酪胺對心率的影響。結(jié)果：冬眠組：缺血1分鐘、120分鐘和加入去甲丙咪嗪后冠脈流出液中去甲腎上腺素的含量分別為1.9±0.5，2.0±0.4和1.9±0.4pmol·g-1·min-1，三者之間差異沒有顯著性(P＞0.05)；電場刺激引起的心臟去甲腎上腺素的溢出在冬眠組為3.24±1.27pm

7、ol·g-1·min-1，對照組為76.89±27.65pmol·g-1·min-1，復(fù)灌組為80.30±23.86pmol·g-1·min-1，經(jīng)方差分析，對照組和復(fù)灌組之間差異沒有顯著性(P＞0.05)，冬眠組與對照組以及冬眠組與復(fù)灌組相比，差異均具有顯著性(P＜0.01)；在冬眠-酪胺組和酪胺組酪胺均可引起心率和去甲腎上腺素溢出的明顯增加(P＜0.05)，而在去甲丙咪嗪存在的情況下，這種增加變得不明顯(P＞0.05)。結(jié)論：離體鼠

8、心急性冬眠時，不伴有心臟去甲腎上腺素自發(fā)性釋放的明顯增加和去甲腎上腺素的非出胞釋放，提示心臟交感神經(jīng)末梢的能量并沒有被耗竭；電場刺激引起的心臟去甲腎上腺素釋放明顯減少，復(fù)灌后這種釋放恢復(fù)至對照組水平，心臟對酪胺的去甲腎上腺素反應(yīng)證明心臟交感神經(jīng)末梢功能的完整性，提示在急性心肌冬眠過程中，心臟的交感神經(jīng)功能可能也經(jīng)歷了一個類似冬眠即神經(jīng)冬眠的過程。 第三部分去甲腎上腺素在急性心肌冬眠形成中的作用及作用機(jī)制 目的：采用離體鼠

9、心急性冬眠模型，探討去甲腎上腺素在急性心肌冬眠形成中的作用。方法：選擇健康雄性SD大鼠30只，采用大鼠離體心臟急性冬眠模型，隨機(jī)分成5組，即對照組、利血平組、去甲腎上腺素組、對照—酪胺組及利血平—酪胺組，每組6只。通過酪胺引起的心率變化評價心臟交感神經(jīng)末梢去甲腎上腺素的耗竭情況，分別測定利血平或生理鹽水處理的大鼠心臟和灌流液中加入去甲腎上腺素灌流的大鼠心臟冬眠時冠脈流量、壓力心率乘積、乳酸脫氫酶漏出(酶聯(lián)分光光度分析法)、心肌三磷酸腺苷

10、(蟲熒光素酶法)、磷酸肌酸(反向離子對液相色譜法)和糖原(化學(xué)比色法)的含量、心肌中Bc1-2/Bax表達(dá)產(chǎn)物平均吸光度(原位免疫組化法)和凋亡的心肌細(xì)胞(末端探針標(biāo)記法)，并應(yīng)用透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果：①大鼠的心率比較：對照—酪胺組大鼠的心率明顯增加(從308.2次/min到409.8次/min，P＜0.05)，利血平—酪胺組大鼠的心率無明顯增加(從275.8次/min到285.7次/min，P＞0.05)，提示利血平耗竭了心

11、臟交感神經(jīng)末梢去甲腎上腺素的儲備。②鼠心急性冬眠時冠脈流量，壓力心率乘積，乳酸脫氫酶漏出，心肌三磷酸腺苷、磷酸肌酸、糖原含量，Bcl-2、Bax表達(dá)產(chǎn)物的平均吸光度值和凋亡心肌細(xì)胞數(shù)比較：利血平組分別為1.37ml/min，1987.6mmHg·bpm，13.83mU·g-1·min，1.98μmol/g、2.95μmol/g、4.36mg/g，0.3436、0.2733和2.0個/視野；對照組分別為1.08ml/min，2342.3m

12、mHg·bpm，14.75mU·g·min，1.53μmol/g、2.33μmol/g、3.37mg/g，0.3880、0.3148和1.50個/視野；去甲腎上腺素組分別為0.40ml/min，1005.1mHg·bpm，22.52mU·g·min，0.65μmol/g、0.93μmol/g、1.77mg/g，0.2725、0.3787和6.33個/視野，前兩組間差異無顯著性意義(P＞0.05)，與對照組相比，去甲腎上腺素組冠脈流量、壓

13、力心率乘積、心肌三磷酸腺苷、磷酸肌酸、糖原含量、Bc1-2表達(dá)產(chǎn)物的平均吸光度值明顯降低(P＜0.05)，乳酸脫氫酶漏出、Bax表達(dá)產(chǎn)物的平均吸光度值和凋亡心肌細(xì)胞數(shù)明顯增加(P＜0.05)。結(jié)論：在離體鼠心急性冬眠模型中，外源性的去甲腎上腺素可以引起心功能進(jìn)行性的降低，這可能與冠脈流量的降低、心肌細(xì)胞的壞死和凋亡有關(guān)，提示去甲腎上腺素可能是加速冬眠心肌結(jié)構(gòu)和功能惡化的一個重要因素，抗腎上腺素能治療可能有利于急性心肌冬眠的形成和維持；而