去卵巢大鼠海馬和額葉皮層HCNP的變化及中樞膽堿能神經系統(tǒng)相關基因表達的變化.pdf

1、目的： 觀察雌激素缺乏對大鼠海馬CA1/CA2區(qū)和額葉皮層HCNP的含量和ChAT、M1AChR、α7nAChR及NMDA受體亞單位NR1基因表達的影響。 方法： 1、實驗動物分組將4月齡雌性SD大鼠30只隨機分為3組：假手術組(Sham組)、去卵巢組(OVX組)和去卵巢給予苯甲酸雌二醇組(OVX+EB組)，每組10只。Sham組為雙側去除少量卵巢上脂肪組織；OVX組為去除雙側卵巢；OVX+EB組為去卵巢手術10

2、天后給予苯甲酸雌二醇皮下注射，100μg/kg，隔日一次。手術后常規(guī)喂養(yǎng)4個月。 2、組織標本的獲取及指標測定麻醉大鼠，開顱并迅速分離海馬背側組織和額葉皮層置于液氮中，于-80℃低溫冰箱保存，用于組織蛋白和組織總RNA的提取。分離大鼠子宮并進行稱重。 2.1 蛋白測定提取海馬背側組織蛋白及額葉皮層組織蛋白并用Bradford法測定蛋白含量，以每毫升樣品中的毫克蛋白量(mg/ml)表示。β-actin作為HCNPPP的內參

3、照，用western-blotting法測定大鼠海馬C-HCNPpp和N-HCNPpp的相對含量。 2.2 mRNA表達的測定用Trizol法提取海馬背側組織和額葉皮層組織總RNA。用β-actin作為內參照，RT-PCR法測定海馬背側組織和額葉皮層HCNPpp mRNA、ChAT mRNA、NR1 mRNA、M1AChRmRNA及α7nAChR mRNA的相對表達量。 結果： 1、大鼠子宮重量變化與Sham和O

4、VX+EB組相比，OVX組大鼠子宮重量明顯降低(P<0.01)，而Sham組和OVX+EB組大鼠子宮重量無差別。 2、大鼠海馬HCNPpp相對含量的變化與Sham和OVX+EB組相比，OVX組C-HCNPpp的相對含量明顯升高(P<0.05)，而Sham組和OVX+EB組之間無差別(P>0.05)。但三組之間N-HCNPpp的相對含量的差別無統(tǒng)計學意義。 3、大鼠皮層HCNPpp相對含量的變化與Sham和OVX+EB組相

5、比，OVX組C-HCNPpp的相對含量明顯升高P<0.05)，而Sham組和OVX+EB組之間無差別(P>0.05)。但三組之間N.HCNPpp的相對含量的差別無統(tǒng)計學意義。 4、大鼠海馬HCNPpp mRNA表達水平的變化與Sham組比較，OVX組和OVX+EB組HCNPpp mRNA的相對表達量的無顯著性差別(P>0.05)；與OVX組比較，OVX+EB組HCNPpp mRNA的相對表達量升高(P<0.05)。 5、

6、大鼠皮層HCNPpp mRNA表達水平的變化Sham組、OVX組和OVX+EB組之間的HCNPpp mRNA的相對表達量無顯著性差異(P>0.05)。 6、大鼠海馬ChAT mRNA表達水平的變化與Sham和0VX+EB組相比，OVX組ChAT mRNA的相對表達量明顯降低(P<0.05)，而Sham組與OVX+EB組之間無差別(P>0，05)。 7、大鼠皮層ChAT mRNA表達水平的變化Sham組、OVX組和OVX+

7、EB組之間的ChAT mRNA的相對表達量無顯著性差異(P>0.05)。 8、大鼠海馬M1 AChR mRNA表達水平的變化與Sham組比較，OVX組M1 AChR mRNA相對表達量明顯升高(P<0.05)，OVX+EB組M1 AChR mRNA相對表達量明顯升高(P<0.01)，而OVX組和OVX+EB組無差別(P>0.05)。 9、大鼠皮層M1 AChR mRNA表達水平的變化Sham組、OVX組和OVX+EB組，

8、三組之間的M1 AChR mRNA的相對表達量無顯著性差異(P>0.05)。 10 大鼠海馬α7nAChR mRNA表達水平的變化與Sham和OVX+EB組相比，OVX組α7nAChR mRNA相對表達量明顯降低(P<0.05)，而Sham組和OVX+EB組無差別(P>0.05)。 11 大鼠皮層α7nAChR mRNA表達水平的變化與Sham和OVX+EB組相比，OVX組α7nAChR mRNA相對表達量明顯降低(P<

9、0.05)，而Sham組和OVX+EB組無差別(P>0.05)。 12 大鼠海馬NR1 mRNA表達水平的變化與Sham和OVX+EB組相比，OVX組NR1 mRNA相對表達量明顯降低(P<0.05)，而Sham組和OVX+EB組無差別(P>0.05)。 13 大鼠皮層NR1 mRNA表達水平的變化Sham組、OVX組和OVX+EB組之間的NR1 mRNA的相對表達量無顯著性差異(P>0.05)。 結論： 1、雌

10、激素缺乏可導致大鼠海馬CA1/CA2區(qū)及額葉皮層HCNP的增多。 2、雌激素缺乏可導致大鼠海馬CA1/CA2區(qū)ChAT、α7 nAChRmRNA表達水平降低，此結果說明ChAT、α7nAChR mRNA水平受雌激素的調控，可能是雌激素缺乏導致AD發(fā)生發(fā)展的分子機制之一。 3、雌激素缺乏可導致大鼠海馬CA1/CA2區(qū)NR1 mRNA表達水平降低，此結果說明NR1mRNA水平受雌激素的調控，可能是雌激素缺乏導致AD發(fā)生發(fā)展的