DADS體內(nèi)外誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化與組蛋白乙?；年P(guān)系.pdf

1、目的：從組蛋白乙酰化水平來研究二烯丙基二硫(diallyldisulfide，DADS)體內(nèi)外誘導(dǎo)人急性髓性白血病HL-60細(xì)胞的分化，揭示DADS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化的分子機(jī)制，尋找治療白血病的新途徑?！　》椒ǎ篋ADS體外誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化及對(duì)組蛋白乙?；降挠绊懀和ㄟ^細(xì)胞形態(tài)觀察、硝基藍(lán)四氮唑(NBT)還原反應(yīng)鑒定細(xì)胞分化；Westernblot檢測(cè)組蛋白H3、H4乙?；郊皃21WAF1的表達(dá)；白血病動(dòng)物模型的建立與

2、鑒定：SCID小鼠右下腹分別注入5×106個(gè)HL-60細(xì)胞，應(yīng)用染色體核形分析及形態(tài)學(xué)觀察等方法檢測(cè)SCID小鼠外周血、肝、脾及骨髓中的白血病細(xì)胞；DADS體內(nèi)誘導(dǎo)SCID小鼠腹腔移植HL-60細(xì)胞分化及對(duì)組蛋白乙?；降挠绊懀悍謩e收集DADS處理(A組)與未處理(B組)的HL-60細(xì)胞，以5×106個(gè)細(xì)胞注射到SCID小鼠腹腔，觀察SCID小鼠成瘤情況。將B組成瘤SCID小鼠又隨機(jī)分為3組，設(shè)空白對(duì)照組，SB陽(yáng)性對(duì)照組，DADS處理

3、組。處死后，檢測(cè)用藥前后瘤體積的變化，計(jì)算抑瘤率；HE染色觀察用藥前后HL-60細(xì)胞的形態(tài)改變；誘導(dǎo)分化率計(jì)算(油鏡記數(shù)200個(gè)細(xì)胞)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)移植瘤組織細(xì)胞的周期分布；毒性觀察；Westernblot檢測(cè)瘤組織的組蛋白H3、H4乙?；郊皃21WAF1的表達(dá)。　　結(jié)果：HL-60細(xì)胞經(jīng)DADS處理后，細(xì)胞增殖明顯受抑，呈劑量-依賴關(guān)系。DADS處理HL-60細(xì)胞24h后，NBT還原反應(yīng)陽(yáng)性率與對(duì)照組相比，其差異無顯著性意義(

4、P＞0.05)，自48h起呈時(shí)間依賴性增加，1.25μg·mL-1為峰值(P＜0.01)。SB組與對(duì)照組相比，其差異有顯著性意義(P＜0.01)，但與1.25μg·mL-1DADS相比，其差異無顯著性意義(P＞0.05)；HL-60細(xì)胞經(jīng)DADS處理后，乙?；慕M蛋白H3、H4的表達(dá)升高，呈劑量-依賴與時(shí)間—依賴關(guān)系，1.25μg·mL-1DADS處理48小時(shí)后，與對(duì)照組比較，H3表達(dá)升高2.5倍，H4升高3.4倍，p21WAF1表達(dá)升

5、高3.8-4.1倍；2.5μg·mL-1DADS處理24小時(shí)后，與對(duì)照組比較，H3表達(dá)升高3.6倍，H4升高4.3倍；腹腔注射可在SCID小鼠體內(nèi)形成白血病移植瘤，瘤塊生長(zhǎng)快，生存時(shí)間為32～38d。外周血在疾病早期無明顯變化，第3周白細(xì)胞數(shù)開始升高，病程晚期，白細(xì)胞明顯升高，可見到與體外培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞形態(tài)相似的早幼粒細(xì)胞。染色體核型分析表明瘤組織細(xì)胞、外周血中的瘤細(xì)胞與體外培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞的染色體組型相同，顯示中著絲點(diǎn)，為人

6、類染色體的特點(diǎn)；DADS對(duì)接種于SCID小鼠右下腹腔的HL-60細(xì)胞具有顯著的生長(zhǎng)抑制作用，42mg·kg-1DADS的抑瘤率達(dá)66.2％；HE染色發(fā)現(xiàn)42mg·kg-1DADS可誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞向中性粒系方向分化，并有部分細(xì)胞凋亡、壞死；用藥前后SCID小鼠的體重?zé)o明顯變化，肝、脾、骨髓檢測(cè)證實(shí)無明顯毒性作用；流式結(jié)果顯示：NS對(duì)照組的SCID小鼠體內(nèi)瘤組織細(xì)胞主要分布在S期，占61.7％；其次分布在G1期，占25.4％；只有少數(shù)分

7、布在G2/M期，占12.8％。經(jīng)42mg·kg-1DADS處理后，G1期細(xì)胞明顯上升，從25.4％上升到63.4％(P＜0.01)。說明DADS能將瘤組織細(xì)胞阻滯在G0/G1期；DADS能提高SCID小鼠體內(nèi)瘤組織乙?；慕M蛋白H3、H4及p21WAF1的表達(dá)，與NS對(duì)照組相比，分別提高了4.1倍、3.2倍及2.8倍，其差異有顯著性意義(P＜0.01)。 結(jié)論：DADS對(duì)體外培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞有增殖抑制作用，呈劑量—依賴效應(yīng)，