VEGF、miR-205及其靶蛋白Ezrin、LaminA-C在卵巢癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、早期轉(zhuǎn)移是卵巢癌的惡性特征之一，但其轉(zhuǎn)移機(jī)制尚未明確。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在卵巢癌患者血清以及癌組織中高表達(dá)，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。本課題組前期對(duì)VEGF誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞株HO-8910后進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，鑒定出17種差異蛋白，結(jié)合文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)其中兩種差異蛋白:Ezrin和Lamin A/C與上皮性卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移高度相關(guān)，推測(cè)VEGF可能通過(guò)

2、直接或間接調(diào)控二者，參與卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移。同時(shí)利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miR-205在Ezrin和Lamin A/C的3'UTR均有結(jié)合位點(diǎn)。進(jìn)一步通過(guò)miRNA基因芯片檢測(cè)VEGF誘導(dǎo)后HO-8910的miRNA表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)其miR-205表達(dá)上調(diào)。由此推測(cè)，VEGF可能部分通過(guò)miR-205調(diào)節(jié)Ezrin和Lamin A/C的表達(dá)實(shí)現(xiàn)調(diào)控卵巢癌侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　目的:
　　進(jìn)一步探討VEGF、miR-205及其靶蛋白Ezri

3、n、Lamin A/C在卵巢癌組織中的表達(dá)及意義。
　　方法:
　　采用ELISA檢測(cè)上皮性卵巢癌及健康志愿者血清中VEGF的含量;采用免疫組化檢測(cè)上皮性卵巢癌組織、卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(vascular endothelial growthfactor receptor1,VEGFR-1)、VEGFR-2、Ezrin、Lamin A/C蛋白的表達(dá)情況和CD31所標(biāo)記的MVD（micro-v

4、essel density）;采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)VEGFR-1和VEGFR-2在四株細(xì)胞中的表達(dá)情況;采用熒光定量PCR方法檢測(cè)上皮性卵巢癌組織、卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中miR-205、Ezrin和Lamin A/C的相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　(1) ELISA檢測(cè)VEGF在上皮性卵巢癌患者血清中的表達(dá)水平（101.48±19.44）高于在健康志愿者血清中的表達(dá)水平(30.69±3.13)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義(P＜0.05);(2)免疫組化結(jié)果顯示:VEGFR-1、VEGFR-2在上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.9％和91.4％，高于卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的陽(yáng)性表達(dá)率(P＜0.05)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VEGFR-1和VEGFR-2在卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);(3)免疫細(xì)胞化學(xué)顯示:VEGFR-1和VEGFR-2在四株卵巢癌細(xì)胞株中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);(4) MVD在上皮性

6、卵巢癌組織中的平均計(jì)數(shù)（7.56±0.508）高于在正常卵巢組織中的平均計(jì)數(shù)(1.22±0.556)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在上皮性卵巢癌組織中的平均計(jì)數(shù)（7.56±0.508）高于在卵巢良性腫瘤組織的MVD平均計(jì)數(shù)(0.7±0.389)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。MVD在卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;(5) Ezrin蛋白和LaminA/C蛋白在上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性

7、表達(dá)率分別為51.7％和60.3％，低于卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但兩者分別在卵巢良性腫瘤組織和正常卵巢組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）.(6)熒光定量PCR結(jié)果顯示:miR-205在上皮性卵巢癌中的相對(duì)表達(dá)量高于在正常卵巢組織中的相對(duì)表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); miR-205在上皮性卵巢癌組織中的相對(duì)表達(dá)量高于在卵巢良性腫瘤組織中的相對(duì)表達(dá)量，但差異

8、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Ezrin和LaminA/C mRNA在上皮性卵巢癌組織中的相對(duì)表達(dá)量低于在正常卵巢組織中的相對(duì)表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Ezrin和LaminA/C mRNA在上皮性卵巢癌組織中的相對(duì)表達(dá)量低于在卵巢良性組織中的相對(duì)表達(dá)量，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1) VEGF在上皮性卵巢癌患者血清中高水平表達(dá)且差異有意義。(2) miR-205在上皮性卵巢癌