一例Wiskott-Aldrich綜合征回復(fù)突變患兒免疫功能和臨床癥狀分析.pdf

1、目的：分析一例 Wiskott-Aldrich綜合征回復(fù)突變患兒基因型、WASp細(xì)胞表達(dá)譜系及其與免疫功能和臨床表現(xiàn)之間的可能關(guān)系。
　　方法：患兒男，現(xiàn)13歲，出生時(shí)發(fā)現(xiàn)濕疹、血小板減少及反復(fù)感染。5歲時(shí)外院診斷為Wiskott-Aldrich綜合征。2009年因血小板減少伴全身反復(fù)出血第一次就診于我院。2010年第二次來我院檢查，經(jīng)WASp流式細(xì)胞術(shù)分析、WASp基因分析及T-A克隆后序列分析證實(shí)為WASp基因回復(fù)突變患兒。對(duì)

2、患兒不同年齡時(shí)采集的標(biāo)本，采用磁珠或流式細(xì)胞術(shù)分選骨髓及外周血各種細(xì)胞亞群，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)WASp，進(jìn)行WAS基因分析；采用Spetratyping法分析T細(xì)胞抗原受體多樣性，采用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色分析T細(xì)胞免疫功能。
　　結(jié)果：經(jīng)頰粘膜刮片采集細(xì)胞進(jìn)行DNA序列分析證實(shí)該患兒生殖細(xì)胞水平突變?yōu)閃ASp基因無義突變（155C>T）?；純河啄陼r(shí)為典型WAS患兒，家系中有因WAS早年病死成員?；純褐?0歲時(shí)，臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)，外周

3、血細(xì)胞部分表達(dá) WASp，經(jīng)過基因序列分析及 PCR產(chǎn)物TA克隆后基因分析，證實(shí)該患兒發(fā)生回復(fù)突變。此后分別于2011年和2012年分析外周血各群細(xì)胞表達(dá) WASp水平，發(fā)現(xiàn)2011年CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞部分表達(dá)WASp（74.44％），CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞WASp表達(dá)陰性，CD19+B細(xì)胞WASp表達(dá)陰性，CD56+NK細(xì)胞部分表達(dá)WASp（93.71%）。CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子能力與正常對(duì)照無差別。骨髓中CD

4、34+細(xì)胞WASp表達(dá)陰性，CD34-細(xì)胞部分表達(dá)WASp，CD42b+巨核細(xì)胞部分表達(dá)WASp（42.31%）。2012年（患兒12歲時(shí)）外周血中CD3+CD4-CD8+T細(xì)胞部分表達(dá)WASp（39.16%）， CD3+CD4+CD8-T細(xì)胞部分表達(dá)WASp（15.3%），CD56+NK細(xì)胞部分表達(dá)WASp（47.65%），而CD19+B細(xì)胞仍不表達(dá)WASp。三次TCRVβ多樣性檢測(cè)結(jié)果無明顯差別。
　　結(jié)論：（1）WAS基因回

5、復(fù)突變可使部分細(xì)胞表達(dá)WASp蛋白，感染、濕疹等臨床癥狀明顯改善，但血小板減少和自身免疫病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)并無明顯變化，提示W(wǎng)ASp基因回復(fù)突變僅能部分修復(fù)免疫功能。（2） WAS基因回復(fù)突變后各種外周血細(xì)胞譜系表達(dá)WASp的種類和水平是可變的，這種變異似乎與臨床表現(xiàn)之間無關(guān)。（3）具有原發(fā)突變，不表達(dá)WASp的各種免疫細(xì)胞和發(fā)生回復(fù)突變，不表達(dá)WASp的免疫細(xì)胞之間是否發(fā)生相互作用，是否對(duì)免疫功能有重要影響，是否更易導(dǎo)致自身免疫性疾病等問題尚