大黃素對(duì)大鼠離體心臟缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的:心肌缺血性疾病(ischemic heart diseases，IHD)是臨床常見(jiàn)的心血管疾病，其發(fā)生率和死亡率逐年上升，嚴(yán)重危害人類健康。臨床上一般采用藥物溶栓、動(dòng)脈搭橋術(shù)、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成形術(shù)等手段恢復(fù)缺血心肌的血液灌注和營(yíng)養(yǎng)支持。但傳統(tǒng)的再灌注治療方法在恢復(fù)心肌供血的同時(shí)，隨之而來(lái)的心肌缺血/再灌注損傷反而會(huì)加重心臟的功能和結(jié)構(gòu)損傷。因此，有關(guān)抗心肌缺血/再灌注損傷研究一直是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。目前研究發(fā)現(xiàn)，藥物預(yù)

2、處理對(duì)心肌缺血/再灌注損傷有一定的保護(hù)作用。我國(guó)中藥資源豐富，在其中尋找和發(fā)現(xiàn)能有效保護(hù)心臟對(duì)抗缺血/再灌注損傷的藥物具有重要的臨床實(shí)用價(jià)值。
　　 大黃素是中藥大黃的有效單體成分，其化學(xué)名稱為1，3，8-三羥基-6甲基蒽醌。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為大黃具有瀉下的功效。近年來(lái)，隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)大黃素藥理作用的大量研究，發(fā)現(xiàn)其還有抗菌消炎、抗腫瘤、保護(hù)心腦血管等作用。目前，有關(guān)大黃素對(duì)心肌缺血/再灌注損傷作用的研究較少，且其機(jī)制尚不明確，因此，本

3、研究旨在通過(guò)Langendorff大鼠心臟離體灌流技術(shù)觀察大黃素對(duì)心肌缺血/再灌注損傷的作用，并探討其可能的機(jī)制。
　　 方法:健康成年雄性SD大鼠，體重270-320g，隨機(jī)分為4組，每組6只，分別為:空白對(duì)照組(Control)，大黃素處理組(Emodin)，大黃素+格列本脲處理組（Emodin+glibenclamide），大黃素+5-HD處理組(Emodin+5-HD)。大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉后，迅速開(kāi)胸取出心臟，懸掛于L

4、angendorff離體心臟灌流裝置上，以80mmHg灌流壓進(jìn)行恒溫、恒壓逆向灌流。將液體小囊插入左心室，室內(nèi)壓力通過(guò)壓力換能器輸入記錄系統(tǒng)，描記離體大鼠心臟功能。心功能指標(biāo)包括:左室發(fā)展壓(left ventricularsystolic pressure，LVDP)、左室舒張末壓(left ventricular end diastolicpressure，LVEDP)、左室壓力最大變化速率(maximal positive and

5、 negativevelocity of left ventrichlar pressure，±LVdp/dtmax)和冠脈流量(coronary vflow，CF)。離體心臟先以K-H液平衡灌流30min，使心臟活動(dòng)達(dá)到穩(wěn)定。然后夾閉灌流通路，造成全心缺血30 min，隨后再灌注120 min。 Emodin組動(dòng)物于術(shù)前24h通過(guò)腹腔注射，按照1mg/100g劑量給予大黃素預(yù)處理;Control組動(dòng)物注射等量溶劑;Emodin+Gli

6、組和Emodin+5-HD組動(dòng)物除接受大黃素注射外，于缺血前10min分別給予離體心臟含格列本脲及5-HD的K-H液灌注。分別觀察、記錄再灌注不同時(shí)間點(diǎn)(5min、10min、20min、30min、60min)的心功能指標(biāo)變化;收集復(fù)灌5min和60min冠脈流出液，分光光度計(jì)法測(cè)定其乳酸脫氫酶(LDH)含量;繼續(xù)灌流至120min，取下心臟。心臟以TTC染色，用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件計(jì)算心肌梗死面積;實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，通過(guò)生物化學(xué)方法測(cè)定心肌

7、組織中超氧化物歧化酶（Superoxidase dismutase，SOD）活性及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)與Control大鼠相比較，Emodin預(yù)處理可明顯改善大鼠心臟缺血/再灌注后心功能的恢復(fù)。給予離體心臟30min缺血和60min再灌注后，Emodin組LVDP、+LVdp/dtmax和-LVdp/dtmax分別為49.0±2.9 mmHg（恢復(fù)率42.4±

8、5.2％），1230.4±101.9 mmHg/s（恢復(fù)率36.7±4.6％）和-910.1±73.9 mmHg/s（恢復(fù)率40.8±2.0％），相比Control組的21.8±2.2 mmHg（恢復(fù)率17.9±1.4％），436.8±72.8 mmHg/s(恢復(fù)率13.6±2.2％)和-363.5±60.5 mmHg/s（恢復(fù)率16.5±2.4％）均有顯著升高(P＜0.01);而LVEDP為43.7±8.4mmHg，明顯低于對(duì)照組的6

9、7.2±2.1mmHg(P＜0.01)。 Emodin大鼠的CF為5.8±0.5ml/min，明顯好于Control的4.2±0.1 ml/min(P＜0.05);Emodin+Gli及Emodin+5-HD大鼠CF分別為3.7±0.4ml/min和4.3±0.4ml/min，均低于Emodin大鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，而與Control大鼠無(wú)差異。結(jié)果表明，Emodin預(yù)處理可明顯促進(jìn)缺血/再灌注心臟功能的恢復(fù)。Emodi

10、n對(duì)心臟缺血/再灌注心臟功能的保護(hù)作用可被非特異性ATP敏感性鉀通道(ATP-sensitive potassium channel，KATP)阻斷劑格列本脲完全消除，亦可被線粒體特異性KATP阻斷劑5-HD大部分阻斷。
　　 (2)再灌注后5min及60 min時(shí)，Emodin大鼠冠脈流出液LDH含量為1165.3±191.0 U/L和675.0±96.1 U/L，均明顯低于Control大鼠的1782.8±84.2 U/L和

11、997.5±92.5U/L(P＜0.05), Emodin+Gli組和Emodin+5-HD組各時(shí)間點(diǎn)LDH與Control組比較均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果表明，Emodin預(yù)處理明顯減輕缺血/再灌注損傷對(duì)心肌的損傷。Emodin抗心肌損傷的保護(hù)作用可被格列本脲和5-HD所消除。
　　 (3)再灌注后120min時(shí)，Emodin大鼠心肌梗死面積為29.4±3.7％，明顯低于Control大鼠69.1±3.4％(P＜0.0

12、1)，Emodin+Gli組和Emodin+5-HD組則分別為67.4±5.9％和63.6±5.8％，與Control組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05）。結(jié)果表明，Emodin預(yù)處理能顯著減小缺血/再灌注造成的心肌梗死，此作用可被格列本脲和5-HD所消除。
　　 (4)再灌注后120min，Emodin大鼠心肌SOD含量為345.2±41.0U/mgprot，相比Control大鼠的247.3±29.8 U/mgprot顯著升高（