miR-22和miR-200b對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討miR-22與miR-200b對人胃癌MGC-803細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及分子機(jī)制。
　　方法：采用原位雜交實(shí)驗(yàn)檢測89例胃癌組織及41例癌旁正常組織中miR-22與miR-200b的表達(dá)水平；采用熒光素酶報(bào)告載體系統(tǒng)檢測miR-22和miR-200b對Wnt-13’UTR熒光酶活性的影響；采用Western blot和qRT-PCR檢測miR-22和miR-200b對其調(diào)控靶基因的蛋白和mRNA表達(dá)變化；運(yùn)用RNA干擾

2、技術(shù)沉默人胃癌MGC-803細(xì)胞中Wnt-1的表達(dá)；采用MTT法、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)以及AnnexinV-FITC和PI染色法檢測miR-22與miR-200b以及si-Wnt-1對人胃癌MGC-803細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　結(jié)果：原位雜交結(jié)果顯示，miR-22與miR-200b在胃癌組織中的表達(dá)水平相對比癌旁正常胃粘膜組織明顯下調(diào)，且兩者在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)；在89例胃癌組織中，miR-22與mi

3、R-200b的表達(dá)水平與患者的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)；熒光素報(bào)告載體系統(tǒng)證實(shí)Wnt-1是miR-22和miR-200b直接調(diào)控的共同靶基因；Western blot和qRT-PCR結(jié)果顯示，miR-22和miR-200b能下調(diào)Wnt-1的蛋白和mRNA表達(dá)水平；MTT檢測顯示，高表達(dá)miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-803細(xì)胞增殖，而miR-22或miR-200b抑制劑能部分逆轉(zhuǎn)si-Wnt-1對

4、人胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖抑制作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高表達(dá)miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-803細(xì)胞遷移，而miR-22或miR-200b抑制劑能部分逆轉(zhuǎn)si-Wnt-1對人胃癌 MGC-803細(xì)胞的遷移抑制作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高表達(dá)miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-8

5、03細(xì)胞侵襲，而miR-22或miR-200b抑制劑能部分逆轉(zhuǎn)si-Wnt-1對人胃癌 MGC-803細(xì)胞的侵襲抑制作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；AnnexinV- FITC和PI染色法檢測結(jié)果顯示，高表達(dá) miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可誘導(dǎo)人胃癌MGC-803細(xì)胞發(fā)生凋亡，而miR-22或miR-200b抑制劑能部分逆轉(zhuǎn)si-Wnt-1對人胃癌MGC-803細(xì)胞的促凋亡作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.