富含脯氨酸的酪氨酸激酶在系統(tǒng)性紅斑狼瘡淋巴細胞中的表達及意義.pdf

1、目的：
　　 通過檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者淋巴細胞中富含脯氨酸的酪氨酸激酶（Proline-Rich Tyrosine Kinase 2，Pyk2）的表達水平，研究Pyk2在淋巴細胞增殖過程的作用，以及Pyk2對淋巴細胞中促進B淋巴細胞增殖的蛋白信號分子B淋巴細胞刺激因子(B lymphocyte stimulator，Blys)的影響和在此過程中可能的作用通路，初步探討Pyk2在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病過程中的意義，為系統(tǒng)性

2、紅斑狼瘡發(fā)病機制的研究提供一定的實驗基礎，為臨床用藥提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、抽取SLE患者活動組、非活動組及健康對照組清晨空腹靜脈血各20ml，采用密度梯度離心法，并用淋巴細胞分離液分離外周血淋巴細胞。
　　 2、采用免疫細胞化學法、實時熒光定量PCR法，分別從蛋白分子水平、mRNA水平檢測Pyk2在SLE患者和健康對照組成員外周血淋巴細胞(PBMCs)中的表達。
　　 3、在SLE

3、患者和健康對照組成員外周血淋巴細胞(PBMCs)中分別加入促淋巴細胞增殖劑（佛波醇乙酸酯，PMA）和Pyk2特異性抑制劑（TyrA9）后，用CCK-8(Cell Counting Kit-8)方法檢測PMA和TyrA9對淋巴細胞增殖的影響。
　　 4、在SLE患者和健康對照組外周血淋巴細胞(PBMCs)中分別加入促淋巴細胞增殖劑（佛波醇乙酸酯，PMA）和Pyk2特異性抑制劑，用半定量PCR方法檢測淋巴細胞中小G蛋白(Rac1)及

4、B淋巴細胞刺激因子(Blys)的表達水平。
　　 5、統(tǒng)計學方法：實驗所得數(shù)據(jù)以均數(shù)士標準差表示，實驗數(shù)據(jù)進行分析采用統(tǒng)計學軟件SPSS13.0，各組總體上有無差別采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法分析，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、免疫細胞化學法測定活化的Pyk2(Tyr402)在SLE中PBMCs的表達：磷酸化的Pyk2在健康對照組PBMCs中有少量表達，SLE患者活動組PB

5、MCs中Pyk2(Tyr402)的表達水平明顯高于SLE患者非活動組和健康對照組，而SLE患者非活動組PBMCs中Pyk2(Tyr402)的表達水平高于健康對照組。在PBMCs中Pyk2信號蛋白的表達和活化在SLE患者明顯高于健康對照組。
　　 2、Pyk2mRNA的表達：與對照組成員相比，SLE患者PBMCs中Pyk2的表達水平明顯升高。且SLE患者活動組和非活動組組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，SLE患者活動組和健

6、康對照組組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，SLE非活動組和健康對照組組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3、PMA及TyrA9對淋巴細胞增殖的影響：PMA對于SLE患者及健康對照組PBMCs的增殖有促進作用。應用TyrA9后，SLE患者PBMCs的增殖受到抑制，而健康對照組成員PBMCs的表達水平無明顯變化。
　　 4、SLE患者淋巴細胞中Blys和Racl的表達水平明顯高于健康對照組。在三組PBM

7、Cs中加入PMA刺激后，SLE患者和健康對照組成員淋巴細胞中Blys和Rac1的表達水平均升高。而先應用Pyk2特異性抑制劑阻斷Pyk2的活化后再加入PMA，SLE患者淋巴細胞中Blys和Rac1的表達無明顯升高，差異無統(tǒng)計學意義。而對于健康對照組，應用TyrA9阻斷Pyk2的活化后，PMA仍可刺激淋巴細胞的增殖，差異有統(tǒng)計學意義?？梢奣yrA9的抑制作用可能對于SLE患者淋巴細胞有特異性。
　　 結(jié)論：
　　 1、Py

8、k2可能參與SLE的發(fā)生發(fā)展，并且與SLE的病情活動性相關(guān)。
　　 2、Pyk2可能通過作用于PBMCs的表達而影響SLE的發(fā)展，而Pyk2的異常表達對SLE具有特異性。
　　 3、Rac1可能是Pyk2誘導SLE患者淋巴細胞增殖及活化的重要信號通路蛋白，Pyk2可通過誘導Rac1的表達而引起T淋巴細胞的異常增值和活化。
　　 4、Pyk2是PMA誘導SLE患者PBMCs增殖及促進Blys表達和活化的一個關(guān)鍵信號