RNA干擾SNIP1表達(dá)對垂體瘤作用研究.pdf

1、目的：垂體瘤是一種常見的良性腫瘤，占顱內(nèi)腫瘤的10~15％左右，且女性患者略多于男性，垂體瘤通常發(fā)生于青壯年時期，由于垂體是人類最重要的內(nèi)分泌器官，其所分泌的激素不僅僅與骨骼以及結(jié)締組織的生長有關(guān)，而且還對內(nèi)分泌腺的活動產(chǎn)生影響，因此垂體腫瘤常常會影響患者的多個方面，包括生長發(fā)育、生殖生育功能、以及學(xué)習(xí)和工作的能力。目前，垂體瘤的治療方法主要包括手術(shù)治療、放射治療和藥物治療，往往需要多重治療方式相結(jié)合，而且還易導(dǎo)致副作用的產(chǎn)生。因此探索

2、垂體腺瘤的發(fā)生、發(fā)展的分子機制，無疑具有重要和積極的意義。
　　方法：首先對正常纖維細(xì)胞L929和小鼠垂體瘤AtT-20細(xì)胞中SNIP基因表達(dá)量進(jìn)行檢測，比較其差異。通過設(shè)計針對SNIP1基因的siRNA，將其通過試劑轉(zhuǎn)染入垂體瘤細(xì)胞，降低細(xì)胞中SNIP1的表達(dá)，進(jìn)而通過實時熒光定量PCR和western-blot分別從基因水平和蛋白水平對其基因沉默效果進(jìn)行比較，然后通過MTT試驗，流式細(xì)胞術(shù)和transwell試驗觀察基因沉默對

3、垂體瘤細(xì)胞增殖，凋亡，細(xì)胞周期以及侵襲力的影響。最后再次通過western-blot對細(xì)胞周期和分裂蛋白表達(dá)的水平進(jìn)行檢測，以探究siRNA干擾SNIP1表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的機制。在152例垂體瘤患者的腫瘤標(biāo)本中，應(yīng)用Realtime RT-PCR和免疫組化的方法測定SNIP1基因和蛋白的表達(dá)水平，研究其與腫瘤大小、腫瘤侵襲性、腫瘤功能性和腫瘤復(fù)發(fā)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:在體外實驗中，通過比較小鼠垂體瘤AtT-20細(xì)胞和正常纖維

4、細(xì)胞L929細(xì)胞中SNIP1基因表達(dá)發(fā)現(xiàn)，該基因在垂體瘤細(xì)胞中表達(dá)量接近正常細(xì)胞的2倍。對設(shè)計的5對siRNA引物進(jìn)行轉(zhuǎn)染實驗，都能有效的下調(diào)垂體瘤細(xì)胞中SNIP1基因的表達(dá)，其中siRNA2效果最好，其相對表達(dá)量僅為0.33。MTT實驗結(jié)果表明siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖受到抑制，其中siRNA5的抑制率最高，達(dá)到了49.5%，而轉(zhuǎn)染后細(xì)胞出現(xiàn)了G1期阻滯現(xiàn)象，siRNA5的組織效應(yīng)最好可達(dá)44%，同時，siRNA5還能使垂體瘤細(xì)胞的凋亡

5、率達(dá)到最高的40%。進(jìn)一步transwell侵襲力實驗表明沉默SNIP基因表達(dá)后腫瘤細(xì)胞侵襲力也明顯低于對照組細(xì)胞。Western-blot結(jié)果表明基因沉默SNIP1基因表達(dá)后，可能通過下調(diào)促細(xì)胞分裂蛋白c-Myc和周期素蛋白CyclinD1的表達(dá)從而降低腫瘤細(xì)胞的增殖能力。通過152例垂體瘤患者的腫瘤標(biāo)本的檢測，結(jié)果表明腫瘤越大，SNIP1基因和蛋白的表達(dá)水平就越高，且SNIP1基因的表達(dá)水平與腫瘤的大小呈正相關(guān)。同時，我們發(fā)現(xiàn)SNI