硫化氫影響同型半胱氨酸誘導心肌細胞H9C2基質金屬蛋白酶-2的酶原活化作用.pdf

1、目的：至今心房顫動發(fā)生和維持的確切機制尚未完全研究清楚，心房組織重構是導致房顫持續(xù)發(fā)生的主要原因，其突出表現(xiàn)為組織纖維化。膠原代謝異常是組織纖維化病變的重要病理改變?；|金屬蛋白酶（MMPs）是體內調節(jié)膠原代謝的主要蛋白酶家族，是心房纖維化的主導因素之一。本研究通過體外培養(yǎng)大鼠心肌細胞，觀察檢測不同濃度Hcy以及H2S分別對心肌細胞MMP-2 分泌或活化的影響，并探討研究兩者的聯(lián)合作用。旨在通過深入研究Hcy-H2S的代謝調節(jié)對MMPs

2、的活化作用，啟發(fā)改善心肌組織纖維化的新思路。
　　 方法：⑴檢測Hcy和H2S對心肌細胞H9C2的細胞活性影響，將不同濃度Hcy（0～1000μmol/L）和H2S（0.1、1.0、10mmol/L）分別作用體外培養(yǎng)的H9C2心肌細胞6h 和24h，利用四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT 法）檢測H9C2 細胞活性。⑵檢測Hcy（0～100μmol/L）影響H9C2 細胞分泌的MMP-2總濃度和酶活性的調節(jié)作用，作用6h 和24h，應

3、用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、明膠酶譜分析等技術檢測MMP-2的表達和酶活性。⑶以NaHS（0.1、1.0、10mmol/L）為H2S的外源性供體，作用H9C2細胞6h和24h，利用明膠酶譜分析技術檢測其對MMP-2酶活性的調節(jié)作用。⑷Hcy（0～100μmol/L）和H2S（0.1、1.0、10mmol/L）共同作用H9C2 細胞6h 和24h，應用MTT 和明膠酶譜法檢測細胞活性改變和MMP-2 活化程度變化情況。
　　

4、結果：①Hcy在1000μmol/L超高濃度時對H9C2 細胞表現(xiàn)顯著的毒性作用（P<0.01），而在本試驗應用濃度范圍（0～100μmol/L）對細胞活性無明顯影響；H2S（0.1、1.0、10mmol/L）以及H2S（0.1、1.0、10mmol/L）和Hcy（0～100μmol/L）共同作用均不影響細胞活性，表明本試驗藥品的應用濃度對H9C2 細胞生長活性無明顯影響作用。②Hcy（0～100μmol/L）濃度依賴性促進H9C2分泌

5、MMP-2，呈濃度依賴性且時間依賴性地上調H9C2細胞MMP-2的酶原活化。③H2S（0.1、1.0、10mmol/L）濃度依賴性地促進MMP-2活化。④Hcy和H2S共同作用組比較平行Hcy組上調H9C2的MMP-2酶活性，表明H2S增強Hcy的MMP-2酶原活化作用。
　　 結論：在0～100μmol/L 圍內同型半胱氨酸濃度依賴性上調H9C2細胞MMP-2的合成分泌，濃度依賴性且時間依賴性地促進MMP-2 酶原活化。硫化氫