hTR基因反義寡核苷酸對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射增敏作用的研究.pdf

1、目的：研究hTR(human telomerase RNA)基因反義寡核苷酸(hTRR)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射增敏作用及其機(jī)制，為尋求新的放療增敏劑奠定理論基礎(chǔ)。
　　 方法：⑴人端粒酶反義寡核苷酸由廣州吉賽生物科技有限公司合成，序列為5‘-GTTAGGGTTAG-3'，另外合成一段該基因的正義鏈5‘-CTAACCCTAAC-3'（縮寫為hTRF），用LipofectamineTM2000(縮寫為L(zhǎng)ip)將正反義鏈轉(zhuǎn)入鼻咽癌CNE-2

2、細(xì)胞內(nèi)，并用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率;⑵指標(biāo)的檢測(cè):用CCK-8法檢測(cè)hTRR對(duì)CNE-2細(xì)胞增殖的影響;用克隆形成實(shí)驗(yàn)分析hTRR對(duì)CNE-2細(xì)胞的放射增敏作用;用FCM法檢測(cè)hTRR對(duì)CNE-2細(xì)胞凋亡和周期的影響;用Flow-Fish法檢測(cè)hTRR處理前后端粒長(zhǎng)度的變化;⑶統(tǒng)計(jì)方法:實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。所得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同處理組間比較用方差分析，方差齊采用方差分析

3、及LSD進(jìn)行檢驗(yàn)，不齊則用Welch近似方差分析及Dunnett's T3進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：hTRR能夠抑制CNE-2細(xì)胞的增殖，其中hTRR2.5μg/Lip6.25μl時(shí)增殖抑制最明顯，抑制率為（73±0.69）％（P＜0.01），hTRF2.5μg/Lip6.25μl組和單獨(dú)Lip7.5μl組與未處理組（沒(méi)有hTRR和Lip處理）相比增殖抑制均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。hTRR能夠增

4、強(qiáng)CNE-2細(xì)胞的放射敏感性，hTRR聯(lián)合放療組與單純放療組相比，其放射增敏比(SER)為1.479。hTRR誘導(dǎo)CNE-2細(xì)胞凋亡，hTRR組、單純放療組凋亡率為（9±2.2）％、（14.2±2.1）％（P＜0.05），hTRR加放療組凋亡率最高，為（23.8±1.87）％(P＜0.01)。hTRR組G2/M、S期細(xì)胞比例與對(duì)照組無(wú)明顯差異，且hTRR聯(lián)合放療與單純放療組相比，G2/M、S期細(xì)胞無(wú)明顯差異。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，hTR