白細胞介素28B的基因多態(tài)性與干擾素抗丙型肝炎病毒治療應(yīng)答的關(guān)系.pdf

1、背景:丙型肝炎(hepatitis C)是一全球健康問題，是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的肝臟慢性炎癥，HCV是導致肝硬化和肝細胞癌的主要病原體之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計，全球丙型肝炎病毒的感染率約為3％，即約有1．8億人感染HCV，每年新發(fā)感染者增加約300～400萬，在中國血清感染率約為3．2％，其中HCV抗體陽性者達4000萬。HCV主要通過血源性途徑進行傳播，包括輸血、性接觸、紋身和吸毒等方式。急性HCV感染者中只有20

2、％～30％的患者可發(fā)生自發(fā)病毒清除，70％～80％的患者發(fā)展為慢性感染者，其中30％可進展為終末期肝病，包括肝硬化、肝癌等。目前以干擾素(IFN)為基礎(chǔ)的抗病毒治療，是丙型肝炎病毒感染唯一的有效治療手段，最理想的抗病毒治療方案為聚乙二醇干擾素(PEG—IFN)聯(lián)合利巴韋林(RBV)，作為抗HCV治療的“標準方案”，但并不是所有患者都能達到持續(xù)病毒學應(yīng)答。在抗病毒治療過程中，一些病毒因素，如基因1型、高基線病毒載量、治療期間的病毒動力學、

3、干擾素敏感決定區(qū)域的氨基酸類型，及這些因素與治療結(jié)果有著顯著的聯(lián)系。對HCV1型的患者治療12月后，只有420％～52％的患者可獲得持續(xù)病毒學應(yīng)答(SVR)，HCV2/3型患者中也有5％的長期處于無病毒學應(yīng)答(NVR)；其中干擾素的不良反應(yīng)可以導致10％～14％的患者被迫減量或提前停藥。
　　 近年來，在非洲、歐洲、東亞人群中進行的全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)研究發(fā)現(xiàn)編碼IFNλ3的IL28B基因附近有一些單核苷酸的多態(tài)位點與H

4、CV病毒自發(fā)清除能力及對干擾素抗病毒治療應(yīng)答有關(guān)，當這些SNP的等位基因發(fā)生變異后，患者對丙型肝炎病毒的自發(fā)清除能力和對干擾素應(yīng)答能力發(fā)生明顯變化。SNP rs8099917位于19號染色體上編碼IFNλ3的IL28B下游約8kb位點處。在歐洲人群中，Suppiah等和Rauch等都論證了IL28BSNP rs8099917與治療應(yīng)答有效和治療失敗相關(guān)。Tanaka等對日本患者也鑒定了IL28B SNP rs8099917與SVR相關(guān)，

5、這比在歐洲人群中更具有深刻的影響，同時他們也發(fā)現(xiàn)SNP rs12980275與無病毒學應(yīng)答關(guān)系密切。rs8099917基因型為T/T的患者，其發(fā)生病毒自發(fā)清除的比率和發(fā)生持續(xù)病毒學應(yīng)答(SVR)百分比明顯高于G/G基因型患者。rs12980275基因型為A/A的患者的持續(xù)病毒學應(yīng)答百分比也明顯高于G/G基因型患者。
　　 目的:目前國內(nèi)對IL28B等位基因與干擾素應(yīng)答關(guān)系鮮見報道，因此，對該院慢性丙型肝炎患者對干擾素治療應(yīng)答情況

6、和IL28B基因多態(tài)性進行回顧性分析研究，比較應(yīng)答組(SVR)與無應(yīng)答組(NVR)的IL28B基因變異頻率，為早期預(yù)測干擾素療效提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1．病例收集：入選病例均為慢性丙型肝炎診斷符合2004年3月中華醫(yī)學會肝病學分會制定的《丙型肝炎防治指南》，基因型均為HCV1型患者，且均接受標準干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療一年，半年后檢測HCV—RNA是否陽性。
　　 2．實驗方法：收集這些患者經(jīng)E

7、DTA處理過的外周血液，運用分子生物學方法提取基因組DNA，PCR擴增后直接測序，對干擾素治療應(yīng)答與無應(yīng)答的慢性丙型肝炎患者的SNPs rs8099917和rs12980275位點進行檢測。
　　 3．統(tǒng)計學分析：應(yīng)用SPSS17．0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，對干擾素抗病毒治療應(yīng)答與不應(yīng)答的慢性丙型肝炎患者的IL28B基因多態(tài)性rs12980275和rs8099917位點的基因表型及等位基因頻率進行分析統(tǒng)計，采用Pearsonx2和

8、關(guān)聯(lián)性檢驗進行等位基因單因素分析和關(guān)聯(lián)分析，比較應(yīng)答組和不應(yīng)答組患者之間的頻率差異，以比值比(OR)及其95％可信區(qū)間(CI)表示相對風險度，以R表示關(guān)聯(lián)性。P值雙側(cè)，α=0．05，當P<0．05時認為差異有統(tǒng)計學意義。R>0為正相關(guān)，R<0為負相關(guān)。
　　 結(jié)果：
　　 1．基因型頻率：在63名SVR患者中，rs12980275基因型A/A55人，占87％，A/G8人，占13％，在34名NVR患者中，rs1298027

9、5基因型A/A23人，占68％，A/G11人，占32％。在63名SVR患者中，rs8099917基因型T/T55人，占87％，T/G8人，占13％，在34名NVR患者中，rs8099917基因型T/T24人，占71％，T/G10人，占29％。在97名丙肝患者中rs12980275和rs8099917均未觀測到G/G基因型。
　　 2．等位基因頻率：在63名SVR患者中，rs12980275 A等位基因頻率為93．7％，G等位基因

10、頻率為6．3％，在34名NVR患者中，rs12980275 A等位基因頻率為83．8％，G等位基因頻率為16．2％。在63名SVR患者中，rs8099917 T等位基因頻率為93．7％，G等位基因頻率為6．3％，在34名NVR患者中，rs8099917 T等位基因頻率為85．3％，G等位基因頻率為14．7％。
　　 3．對SVR組和NVR組的rs12980275基因型比較，OR=3．288，95％CI=[1．171～9．234]

11、，利用Pearson’s檢驗x2=5．416，P=0．020<0．05，二者之間有顯著差異，Pearson’s R=0．236>0，二者呈正相關(guān)。對SVR組和NVR組的rs8099917基因型比較，OR=2．865，95％CI=[1．006～8．154]，利用Pearson’s檢驗x2=4．081，P=0．04<30．05，二者之間有顯著差異，Pearson’s R=0．205>0，二者呈正相關(guān)。對SVR和NVR的rs12980275等

12、位基因頻率比較，OR=2．846，95％CI=[1．086～7．464]，利用Pearson’s檢驗x2=4．828，P=0．028<0．05，二者之間有顯著差異，Pearson’s R=0．158>0，二者呈正相關(guān)。對SVR和NVR的rs8099917等位基因頻率比較，OR=2．543，95％CI=[0．953～6．785]，利用Pearson’s檢驗x2=3．664，P=0．056>0．05，二者之間無顯著差異，Pearson’s

13、R=0．137>0，二者呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1．通過對該院治療的CHC患者IL28B基因多態(tài)性分析，SVR患者中SNPrs12980275位點的A等位基因頻率為93．7％，G等位基因頻率為6．3％，在NVR患者中分別為83．8％，16．2％，二者之間有顯著差異。SVR患者中SNP rs8099917位點的T等位基因頻率為93．7％，G等位基因頻率為6．3％，在NVR患者中分別為85．3％，14．7％，二者之間

14、無顯著差異。rs12980275和rs8099917的基因型和等位基因頻率在SVR、NVR組中的相關(guān)性分析Pearson’s R均大于0，相關(guān)性均呈正相關(guān)。
　　 2．rs12980275位點基因型主要為AA、AG、GG，rs12980275位點基因型主要為TT、TG、GG，而在研究中rs12980275只檢測到AA、AG，rs8099917只檢測到TT、TG，二者均未發(fā)現(xiàn)GG型，rs12980275和rs8099917的GG型