2007～2008年流行期河北省流感病毒血凝素HA1區(qū)基因特性研究.pdf

1、目的：掌握2007～2008年河北省流感流行情況；對新分離流感病毒株血凝素HA1基因進(jìn)行分析比較，闡明基因變異與流感流行的關(guān)系；為疫苗株選擇等流感防治工作提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1在2007年10月～2008年3月通過中國流感/禽流感監(jiān)測信息系統(tǒng)，收集河北省流感樣病例（ILI，influenza-like illness）監(jiān)測數(shù)據(jù)，用Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計，分析ILI在人群中的流行變化趨勢。
　　 2

2、將來自監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院和流感暴發(fā)疫情的咽拭子標(biāo)本用狗腎傳代（MDCK）細(xì)胞培養(yǎng)和分離流感病毒，用豚鼠紅細(xì)胞和流感病毒標(biāo)準(zhǔn)參考血清進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)鑒定分型。在血凝抑制試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取不同時間、地域及型別的流感病毒14株。
　　 3提取病毒RNA，利用RT-PCR方法擴(kuò)增出HA1基因片斷，對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸序列測定，用DNAStar軟件與近年流感流行代表株進(jìn)行序列比較，分析其核苷酸序列和氨基酸序列的同源性及變異情況，以及變異對流感病

3、毒抗原性改變的意義。
　　 結(jié)果：
　　 112所流感監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院ILI就診百分比為3.12％，高峰出現(xiàn)在2008年第5周（5.07％）。兒科門診ILI就診百分比高于內(nèi)科。
　　 22007～2008年流行期河北省流感監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院采集ILI咽拭子標(biāo)本962份，分離出流感病毒79株。經(jīng)分型鑒定，B型Yamagata系68株，B型Victoria系7株，H3N2亞型4株。
　　 3兩起暴發(fā)疫情分別分離到2株B

4、型Yamagata系流感病毒和4株H3N2亞型流感病毒。
　　 4抽取的14株新分離流感病毒株利用特異性引物，采用RT-PCR方法分別擴(kuò)增HA1區(qū)基因片斷，1.5％瓊脂糖凝膠電泳后，均出現(xiàn)相應(yīng)條帶。
　　 5擴(kuò)增的流感病毒HA1區(qū)基因片段進(jìn)行核苷酸序列測定，并與近年疫苗株進(jìn)行核苷酸序列、氨基酸序列及同源性比較。
　　 5.12008年H3N2分離株與2007年毒株A/河北新市/1255/2007相比，6個位點(diǎn)氨基

5、酸發(fā)生同樣的替換（3F>L，45S>N，158R>K，171N>K，173N>K，304A>V），其中一個在抗原決定簇B區(qū)（158R>K），兩個在在抗原決定簇C區(qū)（45S>N，304A>V），兩個在抗原決定簇D區(qū)（171N>K，173N>K）。2008年分離的毒株與WHO推薦2007～2008年流感疫苗株A/Wisconsin/67/2005相比核苷酸同源性為98.0％、氨基酸同源性為97.0％，有10個氨基酸位點(diǎn)不同。進(jìn)化樹結(jié)果顯示是

6、2008～2009年流感疫苗株A/Brisbane/10/2007的類似株。
　　 5.2四株乙型Victoria系毒株與疫苗株B/Malaysia/2506/2004相比未發(fā)現(xiàn)核苷酸的丟失和插入，核苷酸同源性為98.8％～99.1％，氨基酸同源性為99.1％～99.4％，僅有一個位點(diǎn)（109N>K）發(fā)生了相同的氨基酸替換。
　　 5.3 Yamagata系毒株與同期疫苗株B/Malaysia/2506/2004不屬于同

7、一譜系，和2005～2006流行期疫苗株Yamagata系B/Shanghai/361/2002相比，核苷酸同源性為97.5％～97.8％，氨基酸同源性為97.4％～98.0％。有7個氨基酸位點(diǎn)（37T>V，40Y>H，48K>R，108A>P，131P>L，196N>D，251M>V）不同，其中131、196位氨基酸位于抗原決定區(qū)。
　　 結(jié)論：
　　 12007～2008年流感流行期河北省ILI就診和毒株分離時間基本

8、一致，高峰為2007年12月至2008年1月，B型Yamagata系流感病毒為優(yōu)勢毒株。
　　 2 H3N2亞型毒株基因變異較大，與疫苗株A/Wisconsin/67/2005相比，有10個氨基酸位點(diǎn)不同，是新變種，為2008～2009年流感疫苗株A/Brisbane/10/2007的類似株。
　　 3 B型Yamagata系毒株基因變異較大，抗原性發(fā)生了漂移，與疫苗株B/Malaysia/2506/2004不屬于同一譜