AdCTLA-4Ig基因?qū)雽?duì)誘導(dǎo)異基因大鼠胰十二指腸移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】1．建立穩(wěn)定的異基因大鼠胰十二指腸移植的動(dòng)物模型，觀察胰十二指腸移植治療Wistar大鼠I型糖尿病的效果。2．研究基因轉(zhuǎn)導(dǎo)法導(dǎo)入CTLA-4IgG基因?qū)φT導(dǎo)大鼠胰腺移植免疫耐受的作用。 【方法】1．采用鏈脲霉素(streptozotocin,STZ)60mg／kg尾靜脈一次性注射法誘導(dǎo)建立Wistar大鼠I型糖尿病模型。2．SD大鼠為供體，糖尿病Wistar大鼠為受體。采用套管法靜脈吻合、連續(xù)不翻動(dòng)法動(dòng)脈吻合、移植物懸空

2、、橡膠片保溫保濕和溫水復(fù)溫等技術(shù)制作異基因大鼠胰十二指腸移植動(dòng)物模型。3．異基因大鼠胰十二指腸移植模型中，應(yīng)用體外低溫保存狀態(tài)下對(duì)供器官行腺病毒介導(dǎo)CTLA-4IgG基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。轉(zhuǎn)導(dǎo)方法為供器官修剪完成后，經(jīng)腹主動(dòng)脈遠(yuǎn)端灌注含人CTLA4IgG重組腺病毒5×10<'10>pfu的林格氏液1ml，4℃林格氏液保存60分鐘。4．術(shù)后監(jiān)測(cè)血糖，記錄大鼠功能性存活期。術(shù)后3、10、17、28天經(jīng)大鼠眶后靜脈取血，應(yīng)用ELISA法檢測(cè)血清IL-2表

3、達(dá)情況，應(yīng)用West Blot檢測(cè)人CTLA-4IgG表達(dá)情況。 【結(jié)果】1．移植后糖尿病Wisrm大鼠24h血糖恢復(fù)正常，術(shù)后血糖明顯低于未做移植的對(duì)照組。2．對(duì)照組大鼠功能性存活期為11±1天，轉(zhuǎn)導(dǎo)組功能性存活期為33±4天，后者明顯大于前者(P<0.01)。3．對(duì)照組大鼠第10天沒(méi)有檢測(cè)到人CTLA-4IgG蛋白表達(dá)。所有轉(zhuǎn)導(dǎo)組存活病例，第10天均有人CTIA-4IgG表達(dá)。4．轉(zhuǎn)租移植術(shù)后第3天、第10天血清IL-2分別

4、為33.710±7.803pg/ml、47.846±14.050 pg/ml，明顯小于對(duì)照組(P<0.01)。 【結(jié)論】1．本實(shí)驗(yàn)成功建立了大鼠異基因胰十二指腸移植的動(dòng)物模型，簡(jiǎn)單易行，重復(fù)性好，可用于實(shí)驗(yàn)研究。2．大鼠胰十二指腸移植可以治療STZ誘導(dǎo)的I型糖尿病，移植胰腺內(nèi)分泌功能穩(wěn)定。3．體外低溫保存狀態(tài)下對(duì)供器官行腺病毒介導(dǎo)人CTLA—4IgG基因轉(zhuǎn)導(dǎo)是可行的，受體大鼠胰十二指移植術(shù)后血清有人CTLA—4IgG表達(dá)。4．體