瑞舒伐他汀對(duì)體外培養(yǎng)的人成骨細(xì)胞增殖及LRP5、Runx2基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 觀察給予不同濃度的瑞舒伐他汀作用24小時(shí)后，對(duì)體外培養(yǎng)的人成骨細(xì)胞增殖及低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP5)、Runx2基因表達(dá)的影響，初步探討瑞舒伐他汀影響骨代謝可能的分子機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.收集成年男性髂骨松質(zhì)骨（由山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院骨科手術(shù)室在正常手術(shù)過(guò)程中提供）。采用酶消化法分離并純化成骨細(xì)胞，體外培養(yǎng)人成骨細(xì)胞，觀察其形態(tài)和功能。
　　 2.以體外培養(yǎng)的人成骨

2、細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，取?duì)數(shù)期生長(zhǎng)良好的成骨細(xì)胞，給予不同劑量的瑞舒伐他?。?10-910-810-710-6 mol/l）作用24小時(shí)后，應(yīng)用CCK-8比色法觀察細(xì)胞的增殖能力、測(cè)定OD值。
　　 3.在成骨細(xì)胞傳代過(guò)程中，取5瓶生長(zhǎng)良好、生長(zhǎng)率達(dá)70-80％的成骨細(xì)胞，不同劑量（010-910-810-710-6 mol/l）的瑞舒伐他汀干預(yù)24小時(shí)后，棄去培養(yǎng)液，運(yùn)用Trizo(l)法分別提取總RNA，用熒光定量PCR法檢測(cè)成骨

3、細(xì)胞LRP5、Runx2基因的相對(duì)表達(dá)水平。
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。各組總體上有無(wú)差別采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外培養(yǎng)的人成骨細(xì)胞倒置顯微鏡觀察:原代細(xì)胞培養(yǎng)3天后貼壁，梭形、多角形多見(jiàn)，12-15天左右單層鋪滿瓶壁。傳代細(xì)胞多為梭形或三角形，細(xì)胞核大，有多種突起，

4、胞漿內(nèi)可見(jiàn)黑色顆粒。骨鈣素免疫組化染色細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)，胞漿可見(jiàn)棕黃色顆粒狀物質(zhì)。茜素紅染色呈紅色陽(yáng)性鈣化結(jié)節(jié)2.不同劑量的瑞舒伐他?。?10-910-810-710-6 mol/l）作用成骨細(xì)胞24小時(shí)后，采用CCK-8比色法顯微鏡下觀察，成骨細(xì)胞數(shù)量明顯增加、各組OD值均增加，濃度在10-7 mol/l增殖最明顯。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.不同劑量的瑞舒伐他汀（010-910

5、-810-710-6 mol/l）干預(yù)成骨細(xì)胞24小時(shí)，采用熒光半定量PCR法檢測(cè)，結(jié)果顯示:成骨細(xì)胞LRP5、Runx2基因表達(dá)相對(duì)增加，濃度在10-7mol/l基因表達(dá)增加最明顯。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.瑞舒伐他汀可促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。
　　 2.瑞舒伐他汀可能通過(guò)增加成骨細(xì)胞LRP5、Runx2基因的相對(duì)表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞增殖，影響骨代謝。<