非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)膀胱癌原代細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：探討非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)膀胱癌原代細(xì)胞增殖的影響,非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)與CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的區(qū)別。
　　方法：對(duì)膀胱癌原代細(xì)胞采取非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)在37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱和37℃(5％,CO2)培養(yǎng)箱條件下,及CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)在37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱和37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下進(jìn)行培養(yǎng),檢測(cè)分析兩種體系培養(yǎng)基連續(xù)7天pH的比較;采用細(xì)胞增殖曲線及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)差異情

2、況;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析兩種系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞周期及凋亡率影響的比較;并使用RT-PCR、Westernblot技術(shù)檢測(cè)分析兩種系統(tǒng)下的膀胱癌細(xì)胞中survivin、caspase-3基因及蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基與CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基連續(xù)7天pH值穩(wěn)定在7.4左右(P>0.05);而CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大

3、氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基pH值在8.8左右,其明顯高于CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基pH值(P<0.05)。
　　2、細(xì)胞在非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱(324±11)與CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱(320±15)條件下培養(yǎng),細(xì)胞克隆數(shù)基本相同(P>0.05);而在CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下細(xì)胞克隆數(shù)(66±6)比

4、CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下明顯減少(P<0.05)。
　　3、細(xì)胞在非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱與CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)增殖趨勢(shì)基本一致(P>0.05),;而在CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下,比CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下生長(zhǎng)增殖顯著下降(P<0.05)。
　

5、　4、細(xì)胞在非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱與CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng),隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞凋亡數(shù)增加,凋亡率相比無(wú)明顯變化(P>0.05);而在CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下比CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下細(xì)胞凋亡數(shù)明顯增加(P<0.05)。
　　5、細(xì)胞在非CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱與C

6、O2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng),表達(dá)survivin、caspase-3因子與蛋白無(wú)明顯變化(P>0.05);而在CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),caspase-3因子與蛋白表達(dá)增高,survivinmRNA及其蛋白的表達(dá)并未明顯變化,比CO2依賴型細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論：膀胱癌非CO2依賴型細(xì)