髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良的生物學(xué)標(biāo)記蛋白的篩查研究.pdf

1、目的：
　　髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良（Developmental dysplasia of the hip，DDH），是一類具有較高發(fā)病率的先天性發(fā)育性的髖部疾患，早期可導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨的進(jìn)行性退變，誘發(fā)髖關(guān)節(jié)之骨性關(guān)節(jié)炎。DDH疾病的早期診斷難題一直懸而未決。本課題應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究策略，深入分析篩查所得差異表達(dá)蛋白的生物學(xué)特性及其與DDH發(fā)病機(jī)制的關(guān)系，探索對(duì)DDH疾病具有早期診斷價(jià)值的生物學(xué)標(biāo)記蛋白質(zhì)。
　　方法：
　　本研

2、究以DDH患者和正常對(duì)照組的血清以及軟骨組織為研究材料，采用蛋白質(zhì)組學(xué)iTRAQ技術(shù)結(jié)合液相色譜串聯(lián)-質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)，對(duì)比分析DDH組與正常對(duì)照組血清中的蛋白質(zhì)差異表達(dá)譜；并通過蛋白印跡試驗(yàn)（Western Blot）、免疫組化技術(shù)（IHC）和酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）三種方式來(lái)驗(yàn)證；最后以GO分析及KEGG注釋來(lái)獲取差異表達(dá)蛋白的生物學(xué)特性和傳導(dǎo)代謝通路信息。
　　結(jié)果：
　　課題結(jié)果發(fā)現(xiàn)相對(duì)于正常對(duì)照組

3、，DDH患者血清中的具有顯著差異表達(dá)的蛋白質(zhì)共有41種，其中26個(gè)蛋白差異表達(dá)上調(diào)，15個(gè)差異表達(dá)下調(diào)。Western Blot、IHC和ELISA三種方法驗(yàn)證iTRAQ實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。生物信息學(xué)分析顯示本組41個(gè)顯著差異表達(dá)蛋白的亞細(xì)胞定位主要集中于：細(xì)胞及細(xì)胞外部分、細(xì)胞器、細(xì)胞膜；主要分子功能包括：粘合作用、催化活性調(diào)節(jié)、酶的活性調(diào)節(jié)作用；而主要參與的生物學(xué)過程主要包括：?jiǎn)我粰C(jī)體的生物過程、生物調(diào)節(jié)過程、細(xì)胞過程、應(yīng)激反應(yīng)、代謝過程

4、等；主要涉及的代謝、傳導(dǎo)途徑為：補(bǔ)體和凝血途徑，炎癥，吞噬和局部粘附過程等。
　　結(jié)論：
　?。ㄒ唬┍狙芯恳缘鞍踪|(zhì)組學(xué)iTRAQ技術(shù)篩選了41個(gè)DDH疾病中具有顯著差異表達(dá)的蛋白標(biāo)志物，其中差異表達(dá)上升的為：KNG1，F(xiàn)ibrinogen（α,β,γ鏈），凝血因子（V，IX，XI），IGFBP等26個(gè)；差異表達(dá)下降的為：Osteonectin，F(xiàn)ibronectin，TSP1，PBP等15個(gè)。
　?。ǘ〨O分析和KE

5、GG注釋發(fā)現(xiàn)這組差異表達(dá)蛋白的亞細(xì)胞定位集中于：細(xì)胞及細(xì)胞外部分、細(xì)胞器、細(xì)胞膜；主要分子功能包括：粘合作用、催化活性調(diào)節(jié)、酶的活性調(diào)節(jié)；而主要參與的生物學(xué)過程主要包括：?jiǎn)我粰C(jī)體的生物過程、生物調(diào)節(jié)過程、細(xì)胞過程、應(yīng)激反應(yīng)等；主要涉及的代謝、傳導(dǎo)途徑為補(bǔ)體和凝血途徑，炎癥，免疫過程。
　　（三）通過Western Blot、ELISA及IHC三種方式驗(yàn)證，證明iTRAQ技術(shù)是一種穩(wěn)定且可靠的蛋白質(zhì)組學(xué)的定量研究技術(shù)，可用來(lái)篩查檢測(cè)