輔酶Q10對慢性應激大鼠實驗性牙周炎牙齦組織MMP-9和血清CTX-1表達的影響.pdf

1、目的:通過建立大鼠慢性應激模型，用輔酶Q10進行干預，觀測大鼠實驗性牙周炎發(fā)病過程，通過免疫組化的方法，對大鼠牙齦組織中基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases MMPs）、和酶聯(lián)免疫吸附試驗的方法對大鼠血清中Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(C-terminal typeⅠ collagentelopeptide，CTX-Ⅰ)進行測定，探討輔酶Q10對慢性應激大鼠實驗性牙周炎發(fā)病過程的影響，為輔酶Q10臨床應用提供基礎

2、資料。
　　方法:200g左右健康清潔級雄性Wistar大鼠48只，隨機分成3組:空白牙周炎組（N組）、慢性應激牙周炎組（C組）及慢性應激輔酶Q10牙周炎（CQ組）。
　　N組正常喂養(yǎng)，正常飲水;C組給予蒸餾水灌胃和不同的慢性應激;CQ組給輔酶Q10灌胃和不同的慢性應激;慢性應激和輔酶Q10給藥6周后，每組的右側(cè)下頜第一磨牙做實驗性牙周炎模型，左側(cè)做自身對照，且C組繼續(xù)給予蒸餾水灌胃和不同的慢性應激，CQ組繼續(xù)給輔酶Q10灌

3、胃和不同的慢性應激。
　　慢性應激模型的建立:采用隨機數(shù)的方法將七種刺激隨機安排到每周內(nèi)，每日上午進行應激處理，每日1種刺激。七種刺激方式分別為:①束縛1h;②沖水1h;③禁食24h;④電子驅(qū)鼠器1h;⑤泡水1h;⑥禁水24h;⑦潮濕墊料24h。
　　牙周炎模型的建立:以絲線結(jié)扎+黏性高糖飲食+飲自身糞便水法復制大鼠牙周炎模型。牙位是右側(cè)下頜第一磨牙，每隔一天檢查一次大鼠口腔情況，如果絲線有松動或脫落情況，重新進行結(jié)扎。

4、r>　　分別于大鼠實驗性牙周炎造模后的0、2、4、6周末的上午8點（且前一天禁食）觀察測量N組、C組、CQ組的齦袋或牙周袋，對其進行檢測并行統(tǒng)計學分析。隨機選出四只處死，心臟取血，酶聯(lián)免疫吸附法檢測CTX-1并進行統(tǒng)計學分析;迅速取下下頜第一磨牙的牙齦，在10％多聚甲醛液中進行固定，經(jīng)過一系列處理后做成切片:
　　HE染色，400倍顯微鏡下觀察組織學有何變化;
　　天狼猩紅染色，觀察膠原纖維的情況;
　　抗原修復后行免

5、疫組化染色，光鏡下觀察，并對牙周組織中MMP-9進行測定和統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果:
　　1慢性應激動物模型的建立
　　C組與CQ組給予慢性刺激2周后出現(xiàn)倦怠和體重增長緩慢現(xiàn)象，兩組間有差異(P＞0.05），C組、CQ組分別與N組比較，到第4周、第6周末體重差異更加顯著(P=0.000)。
　　2牙周炎動物模型的建立
　　C組、N組、CQ組大鼠的左側(cè)牙周組織在整個實驗過程中都沒有明顯變化，右側(cè)牙周組織在觀測的

6、2、4、6周平均牙周探診深度出現(xiàn)了不同程度的變化:在0周和第2周末3組間以及第4、第6周末N組和CQ組間比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);在第4周末，N組、CQ組分別與C組比較平均牙周探診深度出現(xiàn)差異(P=0.001)，第6周末C組分別與N組、CQ組比較出現(xiàn)顯著統(tǒng)計學差異(P=0.000)。
　　3大鼠實驗性牙周炎牙齦組織學檢測結(jié)果
　　3.1牙齦組織HE染色結(jié)果
　　大鼠自第造實驗性牙周炎模型，隨著時間的延長，牙齦組

7、織中成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞增殖，炎性細胞的量在增多，牙齦上皮內(nèi)出現(xiàn)了棘層增生以及上皮釘突的伸長。
　　3.2牙齦組織天狼猩紅染色結(jié)果
　　在0時刻的牙齦組織中Ⅰ型膠原纖維較多、Ⅲ型膠原纖維可見、各組隨著炎癥的形成和不斷加重Ⅰ型膠原纖維增多、Ⅲ型膠原纖維減少，其Ⅰ型與Ⅲ型膠原纖維的比值呈增高的趨勢，但各組間未發(fā)現(xiàn)有明顯差別。
　　3.3牙齦組織中MMP-9免疫組化檢測結(jié)果
　　0周，3組間，第2、4、6周末N組和

8、CQ組之間比較，MMP-9陽性細胞計數(shù)無差異（P＞0.05）;第2周末C組分別與N組和CQ組比較，MMP-9陽性細胞計數(shù)有顯著差異(P=0.002)。第4、6周末C組分別與N組和CQ組比較有顯著意義（P=0.000）。
　　4實驗性牙周炎大鼠血清中CTX-1 ELISA檢測結(jié)果
　　0周各組間，第2周、第4周和第6周末N組和CQ組之間無差異(P＞0.05);第2周、4周、6周末C組分別與N組和CQ組之間比較有顯著統(tǒng)計學差異（