血卟啉單甲醚聲動力作用對大鼠骨肉瘤細胞的抑制效應及其機制研究.pdf

1、本文就血卟啉單甲醚聲動力作用對大鼠骨肉瘤細胞的抑制效應及其機制進行了研究，主要從以下幾部分展開： 第一部分血卟啉單甲醚聲動力作用對大鼠骨肉瘤細胞UMR-106的急性毒性實驗研究 目的：觀察血卟啉單甲醚聲動力作用對大鼠骨肉瘤細胞UMR-106的急性細胞毒作用。 方法：首先采用MTT法檢測不同超聲輻照時間(0s、10s、30s、60s、90s)及不同HMME濃度(0、10、20、40、50μg/ml)對大鼠骨肉瘤細胞

2、UMR-106存活率的影響，以確定最佳輻照時間和HMME濃度，聲動力參數(shù)(超聲頻率10.50Mhz、聲強：0.5W/cm2)。將大鼠骨肉瘤細胞UMR-106懸液分為：對照組(C組)、單純血卟啉單甲醚組(HMME組)、單純超聲組(U組)和聲動力組(SDT組)，以MTT法檢測各組細胞的存活率，AnnexinV/PI雙染色經(jīng)流式細胞技術(shù)檢測其死亡方式，并以透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果：超聲輻照30s、60s及90s時，可明顯降

3、低大鼠骨肉瘤細胞UMR-106的存活率(P＜0.05)，輻照時間為10s時，對細胞存活率無明顯影響(P＞0.05)；單純HMME對細胞存活率無明顯影響(P＞0.05)。當輻照時間為10s、HMME為20μg/ml和50μg/ml時，細胞存活率明顯下降(P＜0.05)，AnnexinV/PI雙染色檢測及透射電鏡結(jié)果顯示UMR-106細胞存在壞死與凋亡，透射電鏡可見大鼠骨肉瘤細胞UMR-106微絨毛減少，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹，胞漿內(nèi)大小不一空

4、泡形成，線粒體髓樣變，核內(nèi)假性包含體，核周隙增大，胞膜破裂、胞質(zhì)流失，染色質(zhì)邊集，核碎裂、溶解等改變。 結(jié)論：HMME是一種有效的聲敏劑，其聲動力效應對體外培養(yǎng)大鼠骨肉瘤細胞UMR-106具有顯著殺傷作用，可望為骨肉瘤治療提供新的手段。 第二部分血卟啉單甲醚聲動力作用對大鼠骨肉瘤細胞UMR-106的抑制效應及其機制研究 目的：從細胞增殖狀況觀察血卟啉單甲醚聲動力效應對大鼠骨肉瘤細胞UMR-106的遲發(fā)抑制作用，并

5、初步探討其作用機制。 方法：將大鼠骨肉瘤細胞UMR-106懸液分為對照組(C組)、單純血卟啉單甲醚組(HMME組)、單純超聲組(U組)、聲動力組(SDT組)。聲動力參數(shù)(超聲頻率10.50MHz、聲強：0.5W/cm2、輻照時間：10秒)，HMME：20μg/ml，采用MTT法檢測12h、24h、36h、48h的大鼠骨肉瘤細胞UMR-106存活率。經(jīng)流式細胞儀檢測，羅丹明123(Rhodamine 123)檢測線粒體膜電位(△ψ

6、m)；二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)檢測細胞內(nèi)活性氧，F(xiàn)luo-3-Am(乙酰甲酯衍生物)檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。33258核染色觀察細胞核的形態(tài)改變。 結(jié)果：MTT檢測法顯示SDT組細胞存活率分別為69.42％(12h)，50.10％(24h)，44.37％(36h)，and 43.26％(48h)，與U組、C組和HMME組間同一時間段比較，統(tǒng)計學上有顯著差異(P＜0.01)。經(jīng)流式細胞儀檢測，線粒體膜電位降低的細胞

7、百分比、細胞內(nèi)活性氧增高和細胞內(nèi)鈣離子增高的細胞百分比，SDT組與C組，HMME組和U組相比，有顯著差異(P＜0.01)。33258細胞核染色顯示壞死與凋亡，細胞核濃縮和絮狀改變，核邊集。 結(jié)論：HMME-SDT能顯著抑制腫瘤增殖活性，增殖活性受抑制可能與細胞內(nèi)活性氧和細胞內(nèi)鈣離子濃度增高，膜損傷有關(guān)。 第三部分血卟啉單甲醚聲動力作用對大鼠骨肉瘤細胞UMR-106移植瘤的抑制效應 目的：觀察血卟啉單甲醚在UMR-

8、106細胞移植瘤大鼠組織分布情況，以及其聲動力效應對移植瘤的抑制作用。 方法：靜脈注射血卟啉單甲醚，在不同時間點通過高效液相熒光檢測法(HPLC)檢測血卟啉單甲醚在UMR-106移植瘤大鼠肝，肌肉，腫瘤組織達到期峰值的時間，確定最佳的超聲輻照時間。UMR-106移植瘤大鼠分對照組(C組)、單純HMME組(HMME組)、單純超聲組(U組)、聲動力組(SDT組)，處理后觀察其腫瘤體積和重量改變，了解抗腫瘤效應。腫瘤組織石臘包埋、切片

9、，HE染色觀察腫瘤組織形態(tài)學改變，進行免疫組化染色、IPP圖像分析PCNA、TUNNEL的表達情況，探討其抑抗瘤機制。 結(jié)果：尾靜脈注射HMME后，3小時腫瘤組織中HMME濃度達峰值。靜脈注射HMME，3小時后聲動力處理，SDT組與其它對照組比較，腫瘤的體積和重量減小，差異顯著性有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。腫瘤組織石臘切片，IPP圖像分析PCNA表達下降，TUNNEL表達增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。 結(jié)論：