JPH3,一個新的甲基化調控的胃腸腫瘤抑癌基因.pdf

1、在世界范圍內，胃腸道腫瘤是人類最常見且最主要的導致癌癥死亡的惡性腫瘤之一。近年來，腫瘤抑癌基因的表觀遺傳調控失調被認為是腫瘤發(fā)生與發(fā)展的重要機制。
　　 目的：我們發(fā)現(xiàn)了膜耦聯(lián)的關鍵蛋白Junctophilin(JPH)的成員JPH3，該基因在胃腸道腫瘤中啟動子被甲基化，因此我們希望通過相關實驗進一步驗證該基因的功能并闡明其與胃腸道腫瘤發(fā)生和發(fā)展的可能機制。
　　 方法：通過MSP(methylation-specifi

2、cPCR)和BGS(bisulfitegenomesequencing)檢測JPH3的甲基化狀態(tài)；通過半定量RT-PCR和免疫組化檢測正常組織和腫瘤組織中JPH3的表達水平，并分析其與胃腸道腫瘤臨床病理特征和預后的關系；通過體外轉染，獲得穩(wěn)定表達JPH3的胃癌和大腸癌細胞株，觀察體外JPH3對細胞表型的影響，包括細胞的增殖能力和細胞的遷移能力等，并通過檢測細胞內鈣離子濃度、線粒體膜蛋白電位、內質網應激相關和細胞凋亡相關蛋白表達及主要的細

3、胞內信號通路蛋白，初步探討JPH3抑制腫瘤細胞惡性表型的作用機制。
　　 結果：JPH3在大多數(shù)腫瘤細胞和腫瘤組織中表達沉默或降低，而且在這些表達沉默或降低的腫瘤細胞和腫瘤組織中JPH3均被檢測到高度甲基化，但在胃腸道正常粘膜組織中JPH3卻未被檢測到甲基化的發(fā)生。JPH3蛋白在胃腸道正常粘膜組織中呈高表達(正常胃粘膜組織中高表達率：100％；正常腸粘膜組織中高表達率：100%)，而在大部分胃腸腫瘤組織中出現(xiàn)表達缺失或減低(僅3

4、9.6%的胃癌樣本顯示高表達；14.9%的腸癌樣本顯示高表達)。JPH3蛋白的低表達與胃癌的較差的分化程度、有淋巴結轉移、有遠處轉移、較差的侵潤深度、較差的臨床分期和預后均有密切的關系，均具有顯著的統(tǒng)計學差異(p<0.05)。細胞株轉染JPH3后，結果發(fā)現(xiàn)JPH3能抑制腫瘤細胞的生長和移行、促進腫瘤細胞的凋亡；增加細胞內鈣離子濃度，激發(fā)和促進內質網應激反應；引起線粒體膜電位降低，使細胞質內細胞色素C和Smac蛋白表達增加；引起TRB3表

5、達增加，抑制Akt蛋白磷酸化。
　　 結論：JPH3是一個受表觀遺傳學調控的基因，其在胃癌和腸癌中表達沉默或降低，且DNA甲基化是導致JPH3在胃腸道腫瘤中表達沉默或降低的主要原因。JPH3的蛋白表達水平與腫瘤的分化、分期和預后有顯著的相關性。作為一個胃腸道腫瘤潛在的抑癌基因，JPH3轉入腫瘤細胞株后抑制了腫瘤細胞的增殖和移行，并可能通過與內質網應激協(xié)同作用下，經線粒體途徑和TRB3-Akt信號通路途徑促進了細胞凋亡，抑制了腫瘤