妊娠期高鹽飲食重編程血管緊張素系統(tǒng)介導的成年子代心肌凋亡.pdf

1、第一部分妊娠期高鹽飲食對子代心臟發(fā)育和RAS的影響
　　【目的】妊娠期高鹽飲食可改變子代心臟組織的結(jié)構(gòu)，這種改變可能會影響心臟的功能而增加成年子代罹患心血管疾病的風險。本課題主要著眼于研究妊娠期高鹽飲食對子代心臟發(fā)育及RAS的影響。
　　【方法】采用本實驗室已建立的妊娠期高鹽飲食模型。將妊娠第一天的清潔級SD大鼠隨機分為正常組和高鹽組。在妊娠期的第4～21天分別給予常規(guī)飼養(yǎng)（含1%NaCl飼料）和高鹽飼料（含8%NaCl飼料

2、）。妊娠期其余時間及分娩后均給予母鼠常規(guī)飼料喂養(yǎng)，子代在斷奶（出生4周）后至成年皆以常規(guī)飼料喂養(yǎng)。稱量兩組在新生期（出生2天）、青少年期（1月齡）以及成年期（5月齡）三個時間段的心臟重量、身體重量，透射電鏡法觀察心臟組織的超微結(jié)構(gòu)變化。采用放射免疫化學法檢測外周RAS中各主要組分的表達情況，通過免疫組化法和Western blot法測三個時間段心臟組織中AT1與AT2的分布與表達。
　　【結(jié)果】妊娠期高鹽飲食成年子代心臟重量/身體

3、重量的比值明顯增高，電鏡下觀察心臟組織中線粒體內(nèi)嵴減少，呈現(xiàn)“空泡樣”變。放射免疫法測得外周 RAS中的AngⅡ和ACE在新生期有明顯下調(diào)現(xiàn)象。心肌組織中AT1的表達從新生期至成年期持續(xù)性顯著增高，AT2的表達只在成年期出現(xiàn)顯著性增高。
　　【結(jié)論】妊娠期高鹽飲食對子代的心臟發(fā)育有重編程作用，對子代外周 RAS表達及心臟中AT1與AT2的分布有一定的影響。
　　第二部分妊娠期高鹽成年子代心肌凋亡表達及相關(guān)的細胞信號通路

4、>　　【目的】通過在體和離體實驗，研究RAS異常表達與心肌細胞凋亡之間的關(guān)系，并進一步探究相關(guān)的細胞信號通路。
　　【方法】采取DNA末端原位染色法（TUNEL）對妊娠期高鹽飲食的成年心臟凋亡小體進行定量分析；通過瓊脂糖凝膠電泳（DNA ladder）對心臟組織進行凋亡檢測；以心肌母細胞H9C2細胞株為離體實驗對象，加入AngⅡ以及AT2特異性激動劑CGP42112A，觀察誘發(fā)凋亡的情況。以流式細胞儀（Flow Cytometer

5、）和DNA ladder檢測凋亡細胞比例和DNA碎片分布。使用線粒體抽提試劑盒，分離出組織及細胞的線粒體和胞漿，通過Western blot法檢測凋亡信號通路上的相關(guān)蛋白表達。
　　【結(jié)果】第一部分電鏡結(jié)果已證明成年子代心臟組織線粒體內(nèi)脊減少、呈現(xiàn)“空泡樣”變。TUNEL法證實妊娠期高鹽成年子代心肌間凋亡小體表達明顯增多，瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)約180-200bp間距的凋亡細胞典型的DNA梯狀條帶。離體實驗中，流式細胞及DNA lad

6、der實驗證實AngⅡ參與心肌凋亡主要是通過AT2途徑。心臟組織Western blot結(jié)果說明AⅡ誘導的凋亡是由Bax移位至線粒體，釋放出細胞色素C（cytochrome C）至胞質(zhì)，激活caspase-3通路而產(chǎn)生。細胞Western blot結(jié)果顯示，隨著AT2的激動劑CGP42112A濃度升高，caspase-3、cytochrome C在胞質(zhì)中表達增高，cytochrome C在線粒體中表達降低，此過程可被AT2拮抗劑PD12