微囊化成骨細(xì)胞支持臍血造血干-祖細(xì)胞擴(kuò)增的研究.pdf

1、臍血(cord blood，CB)中富含寶貴的造血干/祖細(xì)胞(hematopoietic stem/progenitorcell，HSPC)，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。但由于單份臍血只有50-100ml，只夠體重30kg以下兒童使用，使其移植應(yīng)用受到限制。目前的體外擴(kuò)增手段無(wú)法避免HSPC的過(guò)度分化，輸入體內(nèi)后效果不能令人滿(mǎn)意。 成骨細(xì)胞(osteoblasts，OB)作為骨髓中造血干細(xì)胞微環(huán)境(hematopoietic ste

2、m cellniche)的主要成分，能夠支持HSPC擴(kuò)增，但作用機(jī)制尚不明確。而且，目前的培養(yǎng)方式，無(wú)論是直接接觸培養(yǎng)還是應(yīng)用Transwell板培養(yǎng)，都由于基質(zhì)細(xì)胞貼壁的面積有限而使HSPC擴(kuò)增受到限制。 為了提高HSPC的有效擴(kuò)增倍數(shù)，同時(shí)探討成骨細(xì)胞支持HSPC擴(kuò)增的機(jī)理，本文將成骨細(xì)胞包埋在明膠-海藻酸鈉-殼聚糖(gelatin-alginate-chitosan，GAC)微珠中，與HSPC在無(wú)血清、含少量生長(zhǎng)因子組合的

3、IMDM培養(yǎng)基中進(jìn)行共培養(yǎng)。每天取樣計(jì)細(xì)胞數(shù)，同時(shí)檢測(cè)葡萄糖、乳酸等代謝產(chǎn)物含量變化，并檢測(cè)培養(yǎng)前后CD34+細(xì)胞數(shù)和集落擴(kuò)增倍數(shù)。分別考察氧分壓、微珠直徑、細(xì)胞比率這三個(gè)關(guān)鍵培養(yǎng)參數(shù)對(duì)支持HSPC擴(kuò)增和維持其干細(xì)胞性質(zhì)的作用，篩選最佳培養(yǎng)參數(shù)。并考察不同培養(yǎng)條件下成骨細(xì)胞分泌IL-6和LIF等細(xì)胞因子的量與造血細(xì)胞擴(kuò)增效果的關(guān)系。 結(jié)果表明，5％氧分壓、直徑0.5mm、細(xì)胞比率(OB:HSPC)=2:l時(shí)的擴(kuò)增效果最好，造血總

4、細(xì)胞可以有49.0±4.6-fold的擴(kuò)增，同時(shí)，CD34+細(xì)胞擴(kuò)增了87.6±8.3-fold，CFU-Cs集落擴(kuò)增了9.8±0.8-fold。對(duì)不同條件下成骨細(xì)胞分泌的IL-6、LIF、SCF等細(xì)胞因子研究的結(jié)果表明，造血細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)高低與成骨細(xì)胞IL-6分泌量有關(guān)，CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)與干細(xì)胞特性的維持及LIF等因子分泌量有關(guān)，這說(shuō)明成骨細(xì)胞體外對(duì)造血干/祖細(xì)胞的支持主要是通過(guò)分泌細(xì)胞因子起作用的。 本文采用成骨細(xì)胞微