IL-27在炎癥性腸病炎癥腸黏膜中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景及目的：
　　 炎癥性腸病(IBD)是發(fā)生在胃腸道的慢性炎癥疾病,包括克羅恩病(CD)和潰瘍性性結(jié)腸炎(UC)。其中UC主要發(fā)生在直腸和結(jié)腸,而CD的病變多見于末端回腸和鄰近結(jié)腸。它們的主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、體重下降及腹部包塊等。UC常伴有膿血便,同時(shí)也是結(jié)腸癌的高危因素；而CD常有瘺管形成和腸梗阻。另外炎癥性腸病常有多種腸外表現(xiàn),包括外周關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性紅斑、壞疽性膿皮病、鞏膜外層炎、前葡萄膜炎、口腔復(fù)發(fā)性潰瘍等。此病常反復(fù)

2、發(fā)作,治病花費(fèi)巨大,在病變后期,常常要通過手術(shù)切除病變結(jié)腸,給患者的生理和心理上造成巨大的負(fù)擔(dān)。
　　 IBD在西方國(guó)家相當(dāng)常見,患病率達(dá)100～200/10萬(wàn),而在我國(guó)比較少見。但據(jù)近幾年國(guó)內(nèi)統(tǒng)計(jì)資料報(bào)道,患病人數(shù)逐年增加,近十年文獻(xiàn)資料累計(jì)病例已逾14萬(wàn),推測(cè)CD的患病率達(dá)1.4/10萬(wàn),UC的發(fā)病率為11.6/10萬(wàn)。根據(jù)四川大學(xué)華西醫(yī)院的統(tǒng)計(jì)資料,近10年的患病人數(shù)較過去同期增加了5倍。盡管多年來對(duì)IBD進(jìn)行了大量的研究

3、,但是其病因和發(fā)病機(jī)制仍尚未明確,目前大多學(xué)者認(rèn)為腸壁黏膜免疫調(diào)節(jié)異常、持續(xù)腸道感染、腸壁黏膜屏障缺損、以及遺傳和環(huán)境等因素共同參與該疾病的發(fā)生和發(fā)展。其中免疫反應(yīng)異常在IBD的發(fā)病中的重要作用越來越受到人們的重視。由于免疫系統(tǒng)出現(xiàn)不正常的、持續(xù)性免疫應(yīng)答,引起基因易感者腸道黏膜炎性損傷而致病。其中一些促炎癥因子可能在IBD炎癥發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。早期研究認(rèn)為TNF-a、IL-12在IBD的發(fā)病中發(fā)揮著重要的作用,而近年

4、研究發(fā)現(xiàn)一些新的細(xì)胞因子才是IBD發(fā)病的關(guān)鍵。
　　 白細(xì)胞介素-27(IL-27)是新近發(fā)現(xiàn)的一種IL-6/IL-12家族的異源二聚體細(xì)胞因子,由IL-12p40亞單位相關(guān)蛋白IL-27p28和IL-12p35亞單位相關(guān)蛋白EB13(EBV-induced gene3)組成。在炎癥刺激下表達(dá)在巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和上皮細(xì)胞。其受體由IL-12Rβ2同源蛋白WSX-1/TCCR(T-cell eytokine receptor)

5、和gp130受體構(gòu)成的信號(hào)傳導(dǎo)的異源二聚體。其中g(shù)p130為IL-6、IL-1l和IL-27共用的受體亞單位,WSX-1則是IL-27特有的受體亞單位。IL-27通過和其受體結(jié)合激活JAK1、JAK2、INK2、STAT1、STAT2、STAT3、STAT4和STAT5等轉(zhuǎn)錄因子并且誘導(dǎo)幼稚性CD4+T的分化,但對(duì)記憶性CD4+T沒有作用。并且IL-27還可以激活Thl特異轉(zhuǎn)錄因子T-bet,并在IL-12RB2和IL-12的協(xié)同作用下

6、,誘導(dǎo)Th1的分化產(chǎn)生INF-γ,發(fā)揮促炎癥作用。而在炎癥后期IL-27可通過誘導(dǎo)Th1、Th2和Th17向Treg分化,分泌IL-10,抑制炎癥的進(jìn)展。IL-27的這些作用證實(shí)了IL-27在一些自身免疫性疾病、抗感染及抗腫瘤中發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用。
　　 韓國(guó)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)IL-27在IBD患者基因多態(tài)性分析中與正常明顯不同；另外,Schmidt等研究證實(shí)了IL-27mRNA在CD患者腸黏膜組織中表達(dá)明顯增高。但是就目前查閱的國(guó)

7、內(nèi)外文獻(xiàn)中沒有發(fā)現(xiàn)IL-27蛋白及受體在IBD炎癥腸黏膜中表達(dá)的相關(guān)研究。為了研究國(guó)人中IL-27在炎癥性腸病中所起到的免疫病理作用,進(jìn)一步了解炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制,現(xiàn)通過實(shí)驗(yàn)證明IL-27特異性亞單位p28基因和IL-27受體基因及IL-27蛋白在IBD活動(dòng)期患者炎癥腸黏膜中的表達(dá)情況,以揭示IL-27與IBD的關(guān)系,為將來臨床上找到一種新的、有效的治療IBD的方法提供了理論依據(jù)。
　　 材料和方法：
　　 通過結(jié)腸鏡

8、下收取結(jié)腸黏膜標(biāo)本48例,其中活動(dòng)期的CD患者18例、活動(dòng)期的UC患者15例和健康對(duì)照者15例。所有患者診斷符合《2007我國(guó)炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識(shí)意見標(biāo)準(zhǔn)》,有完整的結(jié)腸鏡及病理學(xué)診斷資料。健康對(duì)照者為同期結(jié)腸鏡檢查未見異常者。所有患者未用過或復(fù)發(fā)前3個(gè)月未用過水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑。術(shù)中通過活檢鉗取標(biāo)本8-10塊,立即置入液氮中冷凍,以備Reverse Transcription-PCR(RT-PCR)和Weste

9、rn-blot用。通過RT-PCR和Western-blot方法對(duì)IBD患者活動(dòng)期炎癥腸黏膜進(jìn)行進(jìn)行基因和蛋白水平進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)取同期結(jié)腸鏡檢查未見異常的患者作為對(duì)照。
　　 結(jié)果：
　　 1.RT-PCR結(jié)果顯示IL-27p28mRNA在CD患者中表達(dá)明顯增高,在UC患者中少量表達(dá),而在健康對(duì)照組中未見表達(dá),各組間差異具有顯著性。
　　 2.RT-PCR結(jié)果顯示IL-27RmRNA在CD中的表達(dá)明顯增高,在UC

10、和健康對(duì)照組微弱表達(dá),CD與UC和健康對(duì)照組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而UC和健康對(duì)照組表達(dá)沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3.Western-blot結(jié)果示IL-27蛋白在CD患者中表達(dá)明顯增高,在UC患者中少量表達(dá),而在健康對(duì)照組中未見表達(dá),各組間差異具有顯著性。
　　 結(jié)論：
　　 1.IL-27p28、IL-27R基因和IL-27蛋白在活動(dòng)期CD患者炎癥腸黏膜中表達(dá)明顯上調(diào)。
　　 2.CD患者中IL-27p