鹿茸活性成分的提取及一種新型微膠囊的制備.pdf

1、鹿茸是傳統(tǒng)名貴中藥,具有溫腎壯陽、益精補血、強筋健骨等功效.鹿茸的化學成分比較復雜,含有多種重要的活性物質:如不飽和脂肪酸和溶血卵磷脂等具有降低血壓、治療心血管疾病的作用；對羥基苯甲醛(PHBD)、次黃嘌呤和磷脂等具有抑制單胺氧化酶(MAO)的作用；雌激素、孕酮等激素對女性更年期綜合癥有預防和治療作用；胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-1)和生長激素(GH)可促進生長發(fā)育、用來治療糖尿病、骨質疏松等疾病.現(xiàn)有的鹿茸加工方式比較粗放,產品結構

2、單一,為進一步拓寬鹿茸的市場應用空間,提高其附加值,本課題采用超臨界流體萃取技術、超聲波強化提取技術和其它蛋白質分離純化技術,從鹿茸中提取三類功效明確、在臨床上具有重要應用價值的活性成分:包括單胺氧化酶抑制劑、天然雌激素和IGF-1等活性多肽.采用動態(tài)法實驗測定了PHBD在超臨界C02中的溶解度；另外還對利用干酵母(S.cerevisiae)細胞作為囊壁材料制備微膠囊進行了初步研究. 首先采用超臨界CO<,2>萃取水炸干鹿茸中具

3、有抗衰老作用的單胺氧化酶抑制劑.通過對萃取溫度、萃取壓力、夾帶劑種類和原料粒度的考察,確立最佳萃取工藝條件,提取率可以達到3.58﹪,萃取物對MAO-B的總抑制活性可以達到3319.13U/g.萃取物對MAO-B的抑制作用呈明顯的量效關系:當萃取物溶液的濃度為278.15 mg/L時,對MAO-B的抑制作用達到93.77﹪,但對MAO-A的抑制率只有24.18﹪.利用HPLC、TLC、GC、GC-MS和放射免疫分析等方法對萃取物的化學組

4、成進行分析,萃取物中除含有對MAO有抑制作用的活性成分次黃嘌呤、對羥基苯甲醛和磷脂外,還含有不飽和脂肪酸、谷甾醇、維生素E、甾體化合物、膽固醇、雌二醇、睪酮和孕酮等物質. 另外,采用超臨界流體萃取和濃縮干鹿茸中的雌激素,雌二醇提取率可以達到0.3342 ng/g鹿茸.萃取物中雌二醇和孕酮含量分別為48.42 ng/g和197.04ng/g,有望作為開發(fā)成預防和治療女性更年期綜合癥產品的原料. 采用超聲波強化提取鮮鹿茸中的

5、:IGF-1.考察了溶液種類和pH、浸提溫度、浸提時間、浸提液用量、浸提次數(shù)及超聲功率等因素的影響.以pH10.0的Ⅰ號緩沖液作浸提液,IGF-1的提取率可以達到5279.29 ng/g鮮茸.采用超聲波強化提取具有提取率高、提取速度快的優(yōu)點.選用10 kDa的超濾膜,將IGF-1粗提液濃縮6～10倍,.IGF-1損失率僅為2.49﹪,且超濾濃縮速度快.利用無水乙醇去除雜蛋白質的效果最佳,雜蛋白質去除率為91.59﹪,IGF-1含量提高8

6、.97倍,IGF-1損失率為24.52﹪.通過陽離子交換層析,總蛋白中IGF-1的含量提高了12.01倍,IGF-1和蛋白質的回收率分別為91.73﹪和66.85﹪.進一步通過SDS-PAGE和高效毛細管電泳鑒定,表明鮮鹿茸提取液中含有IGF-1.另外,通過放射免疫分析法檢測,鹿茸的IGF-1粗提液中還含有生長激素. 以鹿茸凍干粉為原料,首先采用超臨界純CO<,2>萃取鹿茸中的單胺氧化酶抑制劑等脂類活性物質,然后采用溶劑浸提萃余

7、物中IGF-1等活性多肽.結果表明,綜合提取鹿茸中的脂類活性物質和IGF-1等多肽是可行性的. 利用動態(tài)法實驗測定了對羥基苯甲醛(PHBD)在超臨界C02中的溶解度,考察改變溫度或壓力對其溶解度的影響.當溫度恒定時,PHBD在超臨界CO<,2>中的溶解度隨壓力增加而增大；PHBD溶解度隨溫度變化趨勢比較復雜.利用溶解度與壓力和對比密度兩個經(jīng)驗方程進行關聯(lián),關聯(lián)誤差在3.67～11﹪之間,表明這兩個方程可用于PHBD在CO<,2>

8、中溶解度的關聯(lián).利用PR-EOS計算值較實驗結果有較大誤差. 分別以丁香油和水楊酸甲酯為囊芯,以干酵母細胞作為囊壁材料制備一種新型的微膠囊.通過對包埋溫度、芯材比及包埋時間等因素的考察,確定了最佳制備工藝條件,微膠囊中丁香油包埋率可以達到41.26﹪,而水楊酸甲酯包埋率為48.58﹪.通過顯微鏡和電鏡觀察,微膠囊呈規(guī)則的球形,大小均一,直徑在2.0～4.0μm之間.這種新型的微膠囊制備方式,具有操作簡單、包埋率高、不引入有機溶劑