胰腺癌組織中ABCG2、MRP-1的表達及臨床意義.pdf

1、實驗目的:
　　 原發(fā)性胰腺癌約占全身惡性腫瘤的1％-2％。近年來,胰腺癌的發(fā)病率逐年上升。于此同時,盡管在胰腺癌的影像診斷、腫瘤標志物、治療方法等諸多領域已有突出進展,但胰腺癌預后仍不樂觀。術后療效不佳主要歸因于:術后1-2年內(nèi)的局部復發(fā)、腫瘤肝轉(zhuǎn)移或二者并發(fā)。輔助治療有助于提高遠期生存率,尤其對于因腫物浸潤腹膜后隙及腸系膜上動脈的患者,化療仍可作為可選擇的治療手段。到目前為止,種類繁多的化療方案仍沒有將患病生存期的有效改觀,

2、最長中位生存時間在4-9個月之間,而且有效率較低。因此,和其他種類的胃腸道惡性腫瘤比較,胰腺癌是最具化療抗藥性的腫瘤之一。為了開發(fā)出對胰腺癌治療更加有效的藥物,對于胰腺癌耐藥機制的研究已經(jīng)非常急迫?，F(xiàn)有研究結(jié)果表明:在人類腫瘤細胞中,參與MDR(mutidrtlg resistance,多重耐藥)的主要是ABC轉(zhuǎn)運蛋白家族。其成員主要包括:ABCB家族(包括MDR1即P糖蛋白)、ABCC家族(包括MRP-1~MRP-9蛋白)以及新近發(fā)現(xiàn)

3、的ABCG家族(包括ABCG2蛋白等)。其中ABCB家族蛋白發(fā)現(xiàn)較早、論述較多,而對ABCC和ABCG蛋白家族在胰腺癌領域的研究卻十分有限,而且存在部分結(jié)果相互矛盾,本實驗將對“胰腺癌組織中ABCG2、MRP-1的表達及臨床意義”作進一步研究分析。以為臨床用藥個體化、抗癌藥物選擇、及特異性MDR抑制劑因子類藥物的使用提供理論依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 本試驗所用標本均來自中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院普外科2003年至2

4、009年間手術切除的胰腺腫瘤轉(zhuǎn)移灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和外傷及十二指腸癌手術切除的胰腺組織標本。所有標本均有詳細臨床資料,均為初發(fā)病例,手術前未接受放療、化療等抗腫瘤治療。胰腺腫瘤組共80例,年齡范圍50-70歲,平均55歲；高分化26例中分化20例低分化23例良性11例。外傷組織和十二指腸癌手術切除的胰腺18例作為正常對照組,年齡范圍為50-70歲。所有標本經(jīng)10％中性福爾馬林液固定,常規(guī)石蠟包埋,4 um厚切片編號備用,連續(xù)切片2張,兩張分

5、別行ABCG2、MRP-1免疫組化染色。操作嚴格按試劑盒說明進行,光鏡觀察、照相、計數(shù)十個高倍鏡視野下的陽性染色細胞。計算陽性細胞率和平均陽性細胞數(shù),描述ABCG2/MRP-1陽性細胞在癌組織中分布情況。
　　 由兩名病理科醫(yī)師在不知病例臨床資料的情況下獨立閱片,結(jié)果不一致時,采取協(xié)商統(tǒng)一原則。將腫瘤分化程度分三級加良性。ABCG2、MRP-1均為跨膜蛋白,陽性表現(xiàn)為胞膜染成高出背景色的棕黃色。完成染色后于400x光鏡下讀片,評

6、估ABCG2及MRP-1的陽性細胞在癌組織中分布情況,有無分布規(guī)律特點。
　　 多個病理級別之間的陽性細胞率比較采用x2檢驗,均數(shù)的多重比較采用q檢驗,兩均數(shù)比較采用t檢驗,采用spearman法進行組間相關分析。所有結(jié)果均在SPSS13.0統(tǒng)計軟件包中實現(xiàn)。
　　 實驗結(jié)果:
　　 1、ABCG2、MRP-1蛋白在胰腺癌、良性胰腺腫瘤和正常胰腺組織中的表達
　　 ABCG2蛋白的陽性表達特征為在細胞膜或

7、胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒,極少數(shù)出現(xiàn)明顯的粗大粒狀。其在胰腺癌中的表達不均勻并有較明顯的異質(zhì)性,可成劇照或分散分布,在胰腺癌細胞中其陽性率為53.62％(37/69),而在正常胰腺組織中其陽性率僅為16.67％(3/18),且為局灶分布,兩者比較差異顯著(P=0.005),比較胰腺癌和胰腺良性腫物的ABCG2陽性表達率,發(fā)現(xiàn)在良性腫物(切片病理證實全部為胰腺實性乳頭狀瘤)其陽性率為18.18％(2/11),同樣具有統(tǒng)計意義(P=0.0289

8、)；根據(jù)腫瘤大小,以直徑2cm為標準將胰腺癌標本分成兩組,在腫瘤大于2cm組中ABCG2的陽性率為60.78％(31/51),而小于2cm組為33.33％,提示該蛋白與腫塊大小相關(P:0.045)。而對其他因素的相關分析中發(fā)現(xiàn),其與腫瘤病理分期(高中低分化)、臨床UICC分期和是否有淋巴結(jié)無關。MRP-1蛋白位于癌細胞的胞漿和胞膜上,呈均勻已知的棕黃色小顆粒。在胰腺癌細胞中其陽性率為62.32％(43/69),而在正常胰腺組織中其陽性

9、率僅為27.78％(5/18),兩者比較差異顯著(P=0.009)；比較胰腺癌和胰腺良性腫物的ABCG2陽性表達率,發(fā)現(xiàn)在良性腫物(切片病理證實全部為胰腺實性乳頭狀瘤)其陽性率為18.18％(2/11),同樣具有統(tǒng)計意義(P=0.006):根據(jù)腫瘤大小,以直徑2cm為標準將胰腺癌標本分成兩組,在腫瘤大于2cm組中ABCG2的陽性率為70.59％(36/51),而小于2cm組為38.89％,提示該蛋白與腫塊大小相關(P=0.017)；在按

10、病理分期將標本分成高中分化和低分化兩組后,其陽性率分別為71.74％和43.48％,提示MRP-1蛋白在不同分期腫瘤腫瘤中表達具有差異(P=0.022)；而對其他因素的相關分析中發(fā)現(xiàn),其與臨床UICC分期和是否有淋巴結(jié)無關。
　　 2、ABCG2、MRP-1表達的相關性及其意義
　　 將實驗中69例胰腺癌標本按ABCG2蛋白表達情況分為兩組,看MRP-1蛋白的表達是否具有差異。69例胰腺癌標本中,.ABCG2陽性者37例

11、,其中MRP-1陽性28例,陽性率75.68％；ABCG2陰性者32例,其中MRP-1陽性15例,陽性率46.86％,其表達具有差異(P=0.013)。經(jīng)spearman秩合分析,提示MRP-1和ABCG2表達呈正相關(rs=0.489,P=0.044)。
　　 本研究提示:
　　 1.在人類病理標本中,ABCG2在胰腺癌、正常胰腺和胰腺腫瘤中表達具有差異,這一點提示ABCG2參與了胰腺癌的MDR的發(fā)生。
　　

12、2.ABCG2蛋白與腫塊大小相關(P=0.045),此結(jié)果可能提示ABCG2對胰腺癌預后不良具有提示意義。
　　 3.ABCG2和MRP-1蛋白表達明顯相關。
　　 4.初步補充和驗證兩種蛋白的SP實驗中表達特點:本實驗對于ABCG2在胰腺癌病理標本中表達特征描述為“在細胞膜或胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒,極少數(shù)出現(xiàn)明顯的粗大粒狀。不均勻并有較明顯的異質(zhì)性,可成局灶或分散分布”；MRP-1的表達特點為“位于癌細胞的胞漿和胞膜上,