異種脫細胞血管移植物內(nèi)膜增生及其防治的實驗研究.pdf

1、本研究分為四部分： 第一部分：異種脫細胞血管移植物的制備及生物特性的實驗研究 目的：由于心血管移植術對小口徑移植物血管需求量巨大，自體血管常無法滿足。目前的小口徑人工血管易產(chǎn)生內(nèi)膜增生，從而導致移植物遠期通暢率較低。本實驗應用組織工程中的脫細胞技術及肝素結(jié)合處理，試圖構(gòu)建一種新型異種來源的小口徑血管材料。 方法：取新鮮犬頸動脈，應用酶-去污劑法行脫細胞處理，脫細胞后部分血管再進行肝素共價結(jié)合。組織學及掃描電鏡觀察

2、脫細胞效果和膠原纖維、彈力纖維改變；甲苯胺藍染色及血小板沉積實驗觀察肝素結(jié)合程度及抗凝作用。 結(jié)果：犬頸動脈經(jīng)酶-去污劑法行脫細胞處理后，形態(tài)學觀察顯示，細胞去除完全，且基質(zhì)無明顯破壞；甲苯胺藍染色顯示，肝素結(jié)合于血管壁全層，血小板沉積實驗發(fā)現(xiàn)，結(jié)合肝素組的血小板沉積量為(29.75±2.14)×109/L，較未結(jié)合肝素組(71.08±4.83)×109/L明顯減少(p＜0.001)，能較長時間地發(fā)揮抗凝作用。 結(jié)論：酶

3、-去污劑法脫細胞效果好，且有良好的保護基質(zhì)的能力；肝素能穩(wěn)定地結(jié)合于血管壁并發(fā)揮作用。兩者結(jié)合不僅提高了異種血管移植物的組織相容性、結(jié)構(gòu)相容性及血液相容性，而且對預防血管移植物在移植后發(fā)生的內(nèi)膜增生都起到了重要的作用。 第二部分：異種脫細胞血管移植物移植后兔血清影響VSMC分泌MCP-1的實驗研究 目的：探討異種脫細胞血管移植物移植后血清對兔VSMC分泌MCP-1的影響。 方法：將18只兔隨機分為三組：A組包被肝

4、素組(n=6)：移植經(jīng)肝素包被處理的脫細胞血管；B組未包被肝素組(n=6)：移植未經(jīng)肝素包被處理的脫細胞血管；C組采用自體頸靜脈移植作為對照組(n=6)；采用ELISA法觀察移植后兔血清中MCP-1的變化；并觀察移植后兔血清對兔VSMC分泌MCP-1的影響。 結(jié)果：①與未包被肝素組和自體靜脈移植組相比較，包被肝素組顯著抑制血清中MCP-1的生成。②包被肝素組12h和24h的MCP-1含量均較自體頸靜脈移植組和未包被肝素組的有明顯

5、下降，分別為24±2.92pg/mL和25.57±4.56pg/mL。 結(jié)論：采用酶-去污劑法處理犬頸動脈，細胞去除完全，對移植后的炎癥刺激作用與正常自體血管相似；結(jié)合包被肝素的方法，可以有效的抑制血清中MCP-1的濃度，減少血管移植物移植后的炎癥反應發(fā)生，有可能減輕移植物移植后導致VSMC增殖所引起的內(nèi)膜增生的發(fā)生。 第三部分：異種脫細胞血管移植物在不同血流狀況下內(nèi)膜增生的實驗研究 目的：通過對異種脫細胞脫細胞

6、血管移植物在不同血液流速中移植后的多普勒超聲研究，探討肝素包被對異種脫細胞血管移植物在移植術后內(nèi)膜增生所造成的影響。 方法：將脫細胞血管移植物分別雙側(cè)移植到18只兔體內(nèi)：A組(未包被肝素組)(n=9)：B組(包被肝素組)(n=9)，每只兔子在移植吻合后結(jié)扎左側(cè)兩吻合口間的頸動脈，而右側(cè)不結(jié)扎；分別于術后1周，3周和12周，對所有兔作超聲檢測：測量血管內(nèi)徑；計算血流動力學參數(shù)；術后12周取出標本，以觀察移植物血管的組織形態(tài)學變化。

7、 結(jié)果：①A組移植物血管內(nèi)徑無論在結(jié)扎側(cè)或未結(jié)扎側(cè)均較術前明顯縮小，且未結(jié)扎側(cè)管腔內(nèi)徑較結(jié)扎側(cè)明顯縮小，分別為1.87±0.08mm和1.82±0.07mm(p＜0.01)；B組中僅有未結(jié)扎側(cè)第3、12周的內(nèi)徑較術前具有統(tǒng)計學差異，均為1.92±0.06mm(p＜0.05)，兩側(cè)內(nèi)徑間無統(tǒng)計學差異。②兩組間血流峰值速度(PSV)之間無統(tǒng)計學差異，A組中PSV隨時間延長呈上升趨勢，而B組中PSV變化并不明顯；術后第3周時，兩組間阻

8、力指數(shù)(RI)有顯著差異(0.78±0.18vs0.62±0.09p＜0.05)；兩組間未結(jié)扎側(cè)PI偏高于結(jié)扎側(cè)，但無統(tǒng)計學差異。③A組未結(jié)扎側(cè)內(nèi)膜增生明顯，I:M比值增大(0.65±0.15vs0.41±0.09p＜0.001，)；B組兩側(cè)的I:M比值之間無統(tǒng)計學差異。 結(jié)論：脫細胞血管移植物在受到不同剪切力作用下，內(nèi)膜增生程度也不相同；低流速對移植物血管的內(nèi)膜增生具有促進作用；通過肝素包被的方法可以有效地抑制這種內(nèi)膜增生；彩

9、色多普勒超聲檢查為實驗研究脫細胞血管移植物異體移植后的血流動力學變化，以及內(nèi)膜增生改變提供了一種直觀、無創(chuàng)、重復性好的方法。 第四部分：肝素包被對降低因巨噬細胞浸潤所引起的內(nèi)膜增生的實驗研究 目的：通過包被與未包被肝素的脫細胞異種血管在兔雙側(cè)頸動脈旁路移植模型中的對比研究，探討肝素包被對抑制因巨噬細胞浸潤引起內(nèi)膜增生的作用。 方法：用肝素包被及未肝素包被的脫細胞異種血管移植物建立18只雙側(cè)頸動脈旁路移植的兔模型，

10、試驗動物分別于移植后1周(n=6)、3周(n=6)、12周(n=6)后處死，處死前均進行超聲檢查，測量血管內(nèi)徑；對獲取的移植物血管進行組織形態(tài)學、免疫組化及透射電鏡檢查。 結(jié)果：與未包被肝素組相比，肝素包被的異種脫細胞血管在移植后1周可明顯抑制巨噬細胞的浸潤(移植物各段的RAM11陽性細胞數(shù)量顯著減少：23.65±3.81vs41.04±6.18p＜0.01)；同時，PCNA在管壁上的表達亦明顯降低，尤其在第1周(35.73±4