中國(guó)毛蝦（Acetes Chinensis）蛋白水解物中血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的研究.pdf

1、本文首先用胰蛋白酶、S5317酸性蛋白酶、黃海黃桿菌低溫堿性蛋白酶、3942中性蛋白酶、2709堿性蛋白酶五種酶酶解中國(guó)毛蝦蛋白，通過(guò)分析水解產(chǎn)物的可溶性氮、總氮、對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)移酶(ACE)的抑制活性，選取黃海黃桿菌低溫堿性酶和3942中性蛋白酶為制備ACE抑制肽的最佳水解酶。分別做黃海黃桿菌低溫堿性蛋白酶和3942中性蛋白酶酶解中國(guó)毛蝦蛋白的正交試驗(yàn)，對(duì)水解條件進(jìn)行優(yōu)化，得到ACE抑制活性最高的黃海黃桿菌低溫堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物F4和

2、中性蛋白酶酶解產(chǎn)物F7。F4和F7組分的IC50值分別為5mg/mL和8.6mg/mL。F4和F7組分味道鮮美，能夠抵抗人體消化酶和ACE的水解，而保持較高的ACE抑制活性，可以滿足具有防治ACE引發(fā)的高血壓作用的功能食品的風(fēng)味及穩(wěn)定性要求。 考察體外具有ACE抑制活性的中國(guó)毛蝦蛋白酶解產(chǎn)物F4和F7對(duì)腎血管性高血壓大鼠的急性降血壓效果。兩腎—夾型建立腎血管性高血壓大鼠模型，測(cè)定其血壓和血漿中血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的含量變化。

3、結(jié)果顯示F4及F7組分顯著地降低了腎血管性高血壓大鼠的動(dòng)脈血壓。兩種組分也降低了高血壓大鼠血漿中的AngⅡ水平，表明抑制AngⅡ生成是中國(guó)毛蝦蛋白酶解產(chǎn)物急性降壓作用的降壓機(jī)制之一。 對(duì)具有體外和體內(nèi)活性的中國(guó)毛蝦蛋白酶解產(chǎn)物F4和F7進(jìn)行分離純化，制備ACE抑制肽。用截留分子量1000和2000的透析袋透析F4后，發(fā)現(xiàn)F4組分中抑制ACE的肽主要為分子量小于1000的肽。用SephadexG-15和SP-SephadexC-5

4、0進(jìn)一步對(duì)分子量小于1000的組分進(jìn)行分離純化，取活性最好的峰，最后用反相高壓液相C18制備柱純化得到單一組分FIA。通過(guò)氨基酸組成和氨基酸結(jié)構(gòu)分析，確認(rèn)FIA為新型的ACE抑制肽Pro-Arg-Tyr。先后采用層析柱SephadexG-25、SP-SephadexC-50對(duì)F7組分進(jìn)行分離，選取ACE抑制活性最高的峰進(jìn)一步用反相高壓液相色譜C18制備柱進(jìn)行純化得到單一組分FI，經(jīng)氨基酸組成和氨基酸結(jié)構(gòu)分析確定FI為新型的ACE抑制肽S

5、er-Pro。用Lineweaver-Burk法做ACE的酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)曲線，考察Pro-Arg-Tyr和Ser-Pro抑制ACE的模式，結(jié)果顯示這兩種ACE抑制肽競(jìng)爭(zhēng)性的抑制ACE與底物的結(jié)合。 本文也對(duì)中國(guó)毛蝦的發(fā)酵產(chǎn)品—蝦醬中的ACE抑制劑進(jìn)行了研究。通過(guò)水提取、水提取后80％乙醇處理以及無(wú)水乙醇直接提取三種提取方式處理蝦醬分別得到樣品HWE、HWEE80和Eg0。結(jié)果顯示HWE、HWEE80和E80都具有較好的ACE抑制活