不同含量硅酸鈣陶瓷體外成骨效應(yīng)及機制探討.pdf

1、目的：以β-磷酸三鈣（β-Tricalcium Phosphate, β-TCP）為對照，制備了不同組成比的β-TCP和硅酸鈣（Calcium Silicate,CS）復(fù)合材料，初步研究不同含量CS生物陶瓷的體外成骨效應(yīng)，并從基因和蛋白水平上探討其成骨的相關(guān)機制，為進一步體內(nèi)研究提供理論依據(jù)。
　　 方法：選擇出生24h大鼠顱頂骨中的原代成骨樣細胞，經(jīng)純化鑒定后分別與100wt％β-TCP、50wt％CS / 50wt％β-TC

2、P、80wt％CS / 20wt％ β-TCP以及100wt％CS四種陶瓷材料的浸提液接觸培養(yǎng)24h，分別采用MTT方法檢測細胞活力的改變；流式細胞儀觀察在完整細胞周期中處于G0/G1期時DNA的變化情況；分光光度儀測定細胞內(nèi)及上清液中堿性磷酸酶（ALP）的活性及細胞中骨鈣素的含量；在SEM下觀察細胞貼附在4種不同材料表面時的形態(tài)；用ELISA方法檢測上清液中BMP-2含量；用Real time PCR及Western blot方法分別

3、檢測成骨相關(guān)基因和蛋白的表達。
　　 結(jié)果：CS陶瓷材料浸提液刺激細胞24h后，細胞活力及數(shù)量均隨著材料中CS含量的增加明顯增高；細胞周期結(jié)果顯示，含有硅酸鈣材料浸提液處理過的細胞在G0/G1期時DNA含量高于β-TCP組，且100wt％CS組高于50wt％CS及80wt％CS組；同時，細胞內(nèi)及上清液中的ALP水平及骨鈣素含量也隨CS的含量增高而活性增加，且呈現(xiàn)明顯的時間依賴效應(yīng)；SEM觀察發(fā)現(xiàn)，細胞在含有CS的材料表面伸展情況

4、優(yōu)于單純β-TCP的表面；上清液中BMP-2的含量分別與時間和CS含量呈正比；進一步在分子水平上證實與成骨相關(guān)的基因及蛋白，如堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素（OCN）、核心結(jié)合因子（Runx2）、骨形成蛋白（BMP-2）、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）的表達均隨著復(fù)合材料中CS含量的增高而表達量升高。
　　 結(jié)論：不同含量CS生物陶瓷具有顯著地促進成骨樣細胞增殖和成骨的能力，其體外成骨效應(yīng)與CS的含量成正相關(guān)，并主要與成骨相關(guān)基因和蛋白的