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文檔簡介
1、目的:探討FoxO3a/p27kip1信號軸是否介導(dǎo)白藜蘆醇抑制AngⅡ誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移作用。
方法:體外培養(yǎng)人主動脈血管平滑肌細(xì)胞HA-VSMC,不同濃度AngⅡ、白藜蘆醇或二者聯(lián)用干預(yù)HA-VSMC,MTT法檢測細(xì)胞活性,臺盼藍(lán)染色法鑒定白藜蘆醇抑制HA-VSMC的作用是否由藥物的細(xì)胞毒性引起,劃痕愈合法檢測細(xì)胞遷移能力。Western blot檢測AngⅡ、白藜蘆醇或二者聯(lián)用作用不同時間對HA-VSMC細(xì)胞F
2、oxO3a、p-FoxO3a、p27kip1表達(dá)的影響。
結(jié)果:1.AngⅡ干預(yù)HA-VSMC48h,當(dāng)濃度≥10-7mol/L時細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng),與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),濃度與HA-VSMC細(xì)胞相對活力呈正相關(guān),r=0.91,P=0.01。
2.白藜蘆醇干預(yù)HA-VSMC48h,相對細(xì)胞活力降低,與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。臺盼藍(lán)染色結(jié)果示白藜蘆醇濃度≥20μmol/L
3、時細(xì)胞活率下降,與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),濃度與HA-VSMC細(xì)胞存活率呈負(fù)相關(guān),r=-0.97,P=0.04。
3.白藜蘆醇預(yù)處理HA-VSMC40min,AngⅡ干預(yù)48h,AngⅡ+白藜蘆醇組細(xì)胞活力下降,視野遷移細(xì)胞平均數(shù)減少,與Ang組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),AngⅡ增強(qiáng)HA-VSMC遷移活性,與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),白藜蘆醇組細(xì)胞遷移活性減弱,與對照組比較差異
4、有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
4.AngⅡ呈時間依賴性上調(diào)HA-VSMC磷酸化FoxO3a蛋白表達(dá)水平,與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),不影響其總蛋白表達(dá)水平。
5.白藜蘆醇干預(yù)下調(diào)HA-VSMC細(xì)胞磷酸化FoxO3a蛋白表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),且不影響其總蛋白表達(dá)水平。
6.白藜蘆醇抑制AngⅡ誘導(dǎo)FoxO3a蛋白磷酸化,與AngⅡ組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),A
5、ngⅡ下調(diào)HA-VSMC p27kip1蛋白表達(dá),與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),白藜蘆醇預(yù)處理則上調(diào)p27kip1蛋白表達(dá),與AngⅡ組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:1.AngⅡ呈濃度依賴性促進(jìn)HA-VSMC增殖,呈時間依賴性誘導(dǎo)HA-VSMC中FoxO3a蛋白磷酸化。
2.白藜蘆醇呈濃度依賴性抑制HA-VSMC細(xì)胞活性,有效抑制HA-VSMC中FoxO3a蛋白磷酸化。
3.
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