玉屏風湯主要成分大鼠藥動學研究.pdf

1、中藥是依據(jù)中醫(yī)藥理論,在長期的臨床治療經(jīng)驗的基礎(chǔ)上總結(jié)出來的有效方劑,多以復方給藥治療疾病,是典型的復雜系統(tǒng)。目前記載的中藥種類已達12807種,我國醫(yī)學的偉大寶藏,但迄今為止,中藥還沒有真正進入國際醫(yī)藥主流市場。究其原因,中藥經(jīng)驗的東西多,真正的有效成分或有效部位還沒有完全搞清楚,質(zhì)控標準制定困難,藥效學和安全評價及臨床研究比較滯后。在現(xiàn)代醫(yī)藥迅猛發(fā)展的今天,中藥要想全面進入國際市場,首先必須弄清楚中藥化學成分與藥效作用機理之間的關(guān)系

2、,這就要深入研究中藥在體內(nèi)的變化過程,即進行中藥藥代動力學研究,了解中藥有效成分在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄及藥理、毒理性質(zhì)[1]。
　　玉屏風源于元代《丹溪心法》,由黃芪、白術(shù)、防風3味藥組成。方中黃芪為君藥,白術(shù)為臣藥,防風為佐藥,組方比3:1:1,是中醫(yī)扶正固本的經(jīng)典方劑[2],臨床主要用于反復發(fā)作的呼吸道感染、支氣管哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病[3]。本研究以玉屏風湯為工具藥,依據(jù)已報道的藥效學研究結(jié)果和中國藥典,在中醫(yī)藥理論的指

3、導下,選取3味藥的主要活性成分:黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷[4-7]作為研究對象,開展玉屏風的質(zhì)量控制新方法的探討和主要活性成分藥物動力學研究,旨在得出君藥黃芪甲苷在不同組別中的藥動學參數(shù),從藥動學角度探討玉屏風組方的配伍機制。本研究的具體內(nèi)容包括以下兩個部分:
　　第一部分玉屏風湯中黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷含量的測定
　　本研究建立了同時測定玉屏風湯中黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷含量的方法。方法建立的過程中,比

4、較了不同比例的甲醇-水、乙腈-水流動相體系,選定色譜條件;采用儀器tuning文件優(yōu)化的條件,對標準品進行Scan、陽離子和陰離子監(jiān)測掃描,參考已發(fā)表的研究報告,選定質(zhì)譜條件。最終優(yōu)化確定的色譜質(zhì)譜條件為:HederaODS-2(2.0mm×150mm,5mm)色譜柱,流動相為甲醇:水(68:32,v:v),流速:0.2mL/min;電噴霧電離(ESI+),選擇性離子監(jiān)測(SIM)質(zhì)荷比807.50[8],287.05,469.05的離

5、子對,內(nèi)標為替米沙坦。方法學考察實驗得出黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷的精密度RSD均小于5％,黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷含量的加樣回收率分別為95.47%、101.94%和103.70。該方法方便、快捷、穩(wěn)定,可同時測定湯中3味藥主成分的含量,結(jié)果準確可靠。本實驗定量了湯中的3味藥的主成分,為玉屏風主成分體內(nèi)藥動學研究提供了理論基礎(chǔ)。
　　第二部分HPLC-MS法同時測定大鼠血漿中的黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ濃度及藥動學研究

6、r>　　本研究建立了同時測定大鼠血清中黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ含量的方法。方法建立的過程中參照已建立的同時測定玉屏風湯中黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ含量的方法條件,對質(zhì)譜條件進行了優(yōu)化;考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水流動相體系和梯度洗脫,選定色譜條件;考察了不同比例乙醚、乙酸乙酯的液液萃取方法,不同洗脫劑組成的固相萃取方法,甲醇、乙腈沉淀蛋白法,同時考察了內(nèi)標地西泮和替米沙坦,最終選定內(nèi)標和血漿樣品前處理方法。最終優(yōu)化確定的色譜質(zhì)譜條件為:

7、HederaODS-2(2.0mm×150mm,5mm)色譜柱,流動相體系為流動相A:0.01%乙酸水溶液和流動相B:甲醇,采用梯度洗脫,流速:0.2mL/min;電噴霧電離(ESI+),選擇性離子監(jiān)測(SIM)質(zhì)荷比為807.35,287.05的離子對,內(nèi)標為地西泮。通過方法學實驗得出日內(nèi)、日間精密度RSD均小于15%,黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ回收率穩(wěn)定且大于70%。該方法方便、快捷、穩(wěn)定,可同時測定大鼠血清中黃芪甲苷和白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ的含

8、量,結(jié)果準確可靠。
　　“君臣佐使”是方劑的組方原則。君藥在中醫(yī)藥理論中被認為是治療疾病的主要成分。因此,在開展藥動學研究時,重點關(guān)注君藥活性成分的藥動學特征及變化。實驗設(shè)計分為3組:第一組:君藥(黃芪甲苷),第二組:君藥+臣藥(黃芪甲苷+白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ),第三組:君藥+臣藥+佐藥(黃芪甲苷+白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ+升麻苷)。給藥劑量的確定來自于已報道的黃芪甲苷單體(20mg/kg)藥動學給藥劑量,根據(jù)黃芪甲苷、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ和升麻苷在湯中的含

9、量比例得出白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ(2.16495mg/kg)和升麻苷(569.9mg/kg)的給藥劑量。但由此得出的升麻苷給藥劑量過大,最終選擇升麻苷LD50(116.9mg/kg)作為給藥劑量。將各單體配成CMC-Na混懸液灌胃給藥,開展藥動學研究。采用WinNonlin軟件,非房室模型擬合藥動學參數(shù)。結(jié)果如下:黃芪甲苷組(Tmax:2.1±0.55,Cmax:34±7.58,AUC0-24:263.14±100.59,MRT:6.38±1.5