替米沙坦片仿制藥與原研藥質(zhì)量差異研究.pdf

1、1研究背景:
　　仿制藥是與原研藥在藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)均等效的藥物。仿制藥與原研藥含有相同的活性成分、劑型、給藥方式，且純度、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說(shuō)明書均基本一致。另一方面，生物等效藥物以相似的釋放速率釋放活性成分，在作用部位療效相當(dāng)。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)常用于評(píng)價(jià)兩藥是否等效，采用藥時(shí)曲線下面積(Area under the plasma concentration-time curve，AUC)和最大血藥濃度(Maximum plasma conce

2、ntration，Cmax)反映藥物吸收的程度，達(dá)峰時(shí)間（Peak time，Tmax）評(píng)價(jià)藥物的吸收速率。
　　生物等效性評(píng)價(jià)是仿制藥審評(píng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，主要以AUC和Cmax應(yīng)在原研藥90％可信限在80％～125％置信區(qū)間內(nèi)。若仿制藥的活性成分在作用部位以相似的釋放速率釋放，則認(rèn)為它們具有相似的安全性和有效性。仿制藥應(yīng)與原研藥具有相似的藥理活性而不產(chǎn)生預(yù)期之外的臨床作用和不良反應(yīng)。
　　目前，全世界約30％人群不能獲得基本藥

3、物，而在非洲這個(gè)比例更高，達(dá)50％～60％。藥物的高價(jià)格成為基本藥物供給的一個(gè)重要限制原因。在有些發(fā)達(dá)國(guó)家由于政府的補(bǔ)助，人們可以免費(fèi)或以低價(jià)格獲得一些基本藥物，但對(duì)于一些慢性疾病如高血壓、糖尿病、哮喘等，藥物的臨床應(yīng)用仍受價(jià)格影響。
　　為減少公眾藥物的開支，增強(qiáng)公眾對(duì)基本藥物的購(gòu)買力，許多國(guó)家批準(zhǔn)仿制藥上市。1984年美國(guó)通過(guò)Hatch-Waxman法案，該法案允許仿制藥通過(guò)生物等效性實(shí)驗(yàn)后可上市，之后許多國(guó)家也采用了此法用于

4、仿制藥的審批。除生物等效性試驗(yàn)之外，仿制藥無(wú)需進(jìn)行臨床前和臨床實(shí)驗(yàn)（除特殊情況），故在價(jià)格方面常比原研藥更具優(yōu)勢(shì)。近二十年來(lái)，仿制藥的使用已證明是減少藥品支出和增加基本藥物覆蓋率的方法之一。2008年美國(guó)65％以上處方使用仿制藥，占當(dāng)年藥品總費(fèi)用的20％;且2011年該比例已上升至80％。仿制藥的普及和使用不僅僅存在于發(fā)達(dá)國(guó)家，大多數(shù)的低收入和中等收入國(guó)家?guī)缀跞坎少?gòu)和使用仿制藥。仿制藥的使用不僅可降低藥品支出，同時(shí)也是平衡療效和患者醫(yī)

5、療資源的一種手段。
　　在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，仿制藥的安全性和有效性一直飽受消費(fèi)者、醫(yī)藥衛(wèi)生人員和制藥企業(yè)的爭(zhēng)議。有的甚至質(zhì)疑原研藥的審批程序是否能保證藥物的安全性和有效性。醫(yī)藥衛(wèi)生人員和患者認(rèn)同原研藥比仿制藥更安全有效，有報(bào)道在使用仿制藥時(shí)發(fā)生其他的不良反應(yīng)，故醫(yī)生和患者在治療特殊疾病時(shí)會(huì)選用原研藥而非仿制藥，如抗精神病的藥物和治療窗窄的藥物。這類藥物在更換品牌時(shí)可能會(huì)由于濃度的改變發(fā)生中毒癥狀或疾病不能控制的狀況。這引起了FD

6、A的重視，F(xiàn)DA對(duì)上市后的224個(gè)仿制藥進(jìn)行再評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)仿制藥的生物利用度與原研藥存在平均為3.5％的偏差，仿制藥的質(zhì)量和安全性均不如原研藥好。
　　仿制藥與原研藥有效活性成分相同，但所用的賦形劑不同。這些賦形劑為非活性成分，主要用于改善藥物性能、簡(jiǎn)化制劑工藝，提高制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性。但賦形劑的種類和數(shù)量可對(duì)藥物療效產(chǎn)生一定的影響，可通過(guò)改變藥物的性能如硬度、崩解時(shí)限和溶解度，從而影響藥物生物利用度。Smith等研究來(lái)自19個(gè)國(guó)家

7、20家制藥企業(yè)生產(chǎn)的卡維地洛制劑，發(fā)現(xiàn)仿制制劑存在片劑硬度不符合要求、溶出量不足和雜質(zhì)含量過(guò)多等問(wèn)題?？ňS地洛仿制藥所示的這些質(zhì)量問(wèn)題勢(shì)必會(huì)影響該藥物制劑的藥效和耐受性。
　　一般專利藥到期后，原研公司并未透露其制劑處方和制備工藝。這意味著，仿制藥公司和原研藥公司可能會(huì)使用不同的制備工藝生產(chǎn)相同的藥品，從而影響藥品的質(zhì)量和純度。質(zhì)量較差的藥品可能對(duì)社會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的危害，甚至可導(dǎo)致耐藥性菌株的發(fā)展?；钚猿煞稚偌叭艹龆炔畹乃幤穼o(wú)法治愈

8、疾病，過(guò)多的活性成分和雜質(zhì)也將對(duì)病人造成不良影響。由于選擇仿制藥的動(dòng)機(jī)是降低醫(yī)療成本，但如果使用的是質(zhì)量低劣的仿制藥其醫(yī)療成本可能更高。由于市場(chǎng)的驅(qū)動(dòng)力以及藥品監(jiān)管力度不夠?qū)е麓罅康牡唾|(zhì)量藥物流向市場(chǎng)，因此，為確保臨床所用藥物質(zhì)量的合格性，對(duì)所有藥物尤其是仿制藥上市后的再評(píng)價(jià)顯得尤為重要。
　　替米沙坦是一種強(qiáng)效的選擇性血管緊張素Ⅱ受體(AngiotensinⅡ receptortypeⅠ，AT1)抑制劑，用于原發(fā)性高血壓和有心血

9、管危險(xiǎn)而不能接受血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（Angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI）治療的患者。替米沙坦對(duì)收縮壓和舒張壓均有降低效果，除降壓效果較好外，不良反應(yīng)和耐受性較ACEI和其他AT1抑制劑少。替米沙坦在糖尿病患者中有腎臟保護(hù)作用，提高患者生活質(zhì)量。
　　替米沙坦具有親酯性，在水中幾乎不溶，且易解離，在不同pH水性介質(zhì)中溶解性差異明顯。在pH3～9的水性介質(zhì)中幾乎不溶，在低、高p

10、H溶液中溶解度增大。替米沙坦具有多晶型，分別為A、B、C晶型。替米沙坦屬于生物藥劑學(xué)分類Ⅱ類藥物，溶出是影響其生物利用度的限速步驟。
　　2目的:
　　從片劑的含量、有關(guān)物質(zhì)及在四個(gè)不同的pH值溶出介質(zhì)（分別為1.2、4.5、7.5和水）中的溶解度和溶出曲線比較了市售的10個(gè)替米沙坦仿制制劑與原研制劑美卡素(@)的質(zhì)量差異。
　　3方法:
　　3.1替米沙坦分析方法的建立及驗(yàn)證
　　采用HPLC法測(cè)定溶液中

11、的替米沙坦含量。
　　3.1.1色譜條件
　　固定相:Agela C18柱(5μm，4.6×150mm);流動(dòng)相:甲醇∶50mM磷酸二氫銨=65∶35，磷酸調(diào)節(jié)pH為3.0;流速:1mL·min-1;柱溫:40℃;檢測(cè)波長(zhǎng):298nm;進(jìn)樣量:20μL。
　　3.1.2線性關(guān)系考察
　　配制濃度為0.04、0.064、0.08、0.096、0.16mg·mL-1的替米沙坦標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL注入色

12、譜儀測(cè)定。以替米沙坦峰面積為橫坐標(biāo)(X)，替米沙坦?jié)舛葹榭v坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程。
　　3.1.3重復(fù)性試驗(yàn)
　　配制濃度為0.08 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)替米沙坦溶液6份，進(jìn)樣分析。
　　3.1.4回收率試驗(yàn)
　　通過(guò)添加80％、100％、120％的替米沙坦到預(yù)處理的替米沙坦溶液中，混合均勻后進(jìn)樣分析。每個(gè)樣品平行操作3份。
　　3.2含量測(cè)定
　　取20片替米沙坦片稱重，計(jì)算平均片重，

13、粉碎研磨。稱量相當(dāng)于8mg替米沙坦的粉末置于100mL容量瓶中，加入約70mL的稀釋劑(0.005mol·L-1NaOH溶液）后超聲5min至完全溶解，靜置后用稀釋劑定容至刻度。取部分溶液用0.22μm過(guò)濾器濾過(guò)，采用HPLC法測(cè)定續(xù)濾液中替米沙坦含量。
　　3.3溶解度測(cè)定
　　稱量相當(dāng)于20mg替米沙坦的粉末溶解于1mL不同pH值溶出介質(zhì)（分別為1.2、4.5、7.5和水）中，充分混勻，將制得的混懸液37℃放置48h。離

14、心后取上層液用0.22μm濾膜過(guò)濾，采用HPLC法測(cè)定續(xù)濾液中替米沙坦含量。
　　3.4有關(guān)物質(zhì)測(cè)定
　　稱量相當(dāng)于8mg替米沙坦的粉末溶解于8mL稀釋劑(0.005mol·L-1NaOH溶液)中，充分混勻，取上清液用0.22μm濾膜過(guò)濾，續(xù)濾液采用HPLC法測(cè)定分析。對(duì)于續(xù)濾液濃度過(guò)高樣品，先將續(xù)濾液稀釋1000倍后進(jìn)樣分析。采用面積歸一化法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的百分比含量。
　　3.5溶出度研究
　　按照中國(guó)藥典20

15、10版規(guī)定的溶出度測(cè)定法第Ⅱ法（槳法），取替米沙坦片6片，分別投入溫度37℃±0.5℃、轉(zhuǎn)速75r/min的900mL脫氣介質(zhì)中，分別于5、10、15、20、30min取樣10mL，同時(shí)補(bǔ)充37℃±0.5℃新鮮介質(zhì)10mL，樣品立即采用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，自取樣至濾過(guò)應(yīng)在30s內(nèi)完成。取續(xù)濾液在相應(yīng)波長(zhǎng)處測(cè)定A值，計(jì)算溶出介質(zhì)中藥物濃度，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積溶出百分率，繪制溶出曲線。
　　4結(jié)果:
　　4.1含量測(cè)定

16、r>　　替米沙坦測(cè)定的HPLC法，在0.04～0.16mg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，重復(fù)性、回收率均滿足體外樣品定量測(cè)定要求。USP規(guī)定替米沙坦的平均含量為標(biāo)示量的95％～110％，本研究所選替米沙坦片劑平均含量均符合要求。
　　4.2溶解度測(cè)定
　　原研制劑和Generic1、4和7的替米沙坦在水和pH7.5介質(zhì)中溶解性很好，Generic3在這兩種介質(zhì)中溶解度也較高。原研制劑和仿制制劑在pH1.2的介質(zhì)中溶出稍好

17、，而pH4.5介質(zhì)中溶解度均較差。
　　4.3有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定
　　Generic1在本實(shí)驗(yàn)條件含有最多種類的有關(guān)物質(zhì)，其次是Generic9，5和4，Generic2、3和6含有關(guān)物質(zhì)的種類最少。USP規(guī)定替米沙坦片中單個(gè)雜質(zhì)含量不應(yīng)超過(guò)0.2％，依據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)Generic8有2個(gè)雜質(zhì)超標(biāo)，Generic4、9和10各有一個(gè)雜質(zhì)超標(biāo)。原研制劑在所有制劑中總雜質(zhì)含量最少，其次是Generic2和6。而Generic9雜質(zhì)總含量最

18、多，其次是Generic8和10。
　　4.4溶出度
　　4.4.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
　　采用不同pH值介質(zhì)（分別為1.2、4.5、7.5和水）配制替米沙坦標(biāo)準(zhǔn)溶液，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。選擇最大吸收波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)。結(jié)果顯示pH1.2、pH4.5、水和pH7.5介質(zhì)中的檢測(cè)波長(zhǎng)分別為291nm、297nm、296nm和296nm。
　　4.4.2在pH7.5溶出介質(zhì)中的溶出曲線
　　4個(gè)

19、仿制制劑在此介質(zhì)中溶出差，60min內(nèi)替米沙坦累積溶出量小于20％，遠(yuǎn)低于USP規(guī)定的片劑溶出度要求。其余7個(gè)仿制制劑溶出效果好，在30min內(nèi)的累積溶出量均達(dá)到80％以上。
　　4.4.3在水中的溶出曲線
　　6個(gè)仿制制劑和原研制劑在30min內(nèi)累積溶出量均達(dá)到75％以上。在pH7.5溶出差的4個(gè)仿制制劑在此介質(zhì)中溶解性也較差，60min內(nèi)的累積溶出量不足10％。
　　4.4.4在pH4.5溶出介質(zhì)中的溶出曲線

20、>　　原研制劑和仿制制劑在此種介質(zhì)中的累積溶出量均較少，可能與替米沙坦在此介質(zhì)中的溶解度很小相關(guān)。只有3個(gè)制劑的釋放量超過(guò)50％，Generic1在此介質(zhì)中的溶出較其他制劑好，此外有4個(gè)仿制制劑的溶出量低于定量下限，故未能繪制溶出曲線。
　　4.4.5在pH1.2溶出介質(zhì)中的溶出曲線
　　除Generic3外，所有制劑60min內(nèi)的累積溶出量均達(dá)到標(biāo)示量的80％以上，但只有1個(gè)制劑30min內(nèi)的累積溶出量達(dá)到75％以上。Ge

21、neric360min累積溶出量少于40％。Generic5、9和10在此介質(zhì)中溶出非常迅速，5min基本完全溶出。
　　4.5溶出曲線相似度比較
　　通過(guò)相似因子f2來(lái)定量評(píng)價(jià)仿制制劑與原研制劑溶出曲線之間的差別。若f2值在50～100之間，則表明兩種制劑的溶出度相似或相同。f2=50×log{[1+1/a∑(c)=(n)(c)=1(R(c)-T(c))2]-0(8)×100}
　　其中n代表取樣點(diǎn)數(shù)目，Rt和Tt分

22、別為在t時(shí)間點(diǎn)的參比制劑和試驗(yàn)制劑平均累積溶出百分率。
　　在pH7.5和pH4.5溶出介質(zhì)中，只有Generic3和Generic8與原研制劑的溶出度相似。Generic1、4和7在水和pH1.2溶出介質(zhì)中與原研制劑的溶出度相似。本研究所選的10個(gè)替米沙坦仿制制劑無(wú)一種制劑在四種溶出介質(zhì)中的溶出度均與原研制劑相似。
　　5討論:
　　藥物的體外質(zhì)量在某種程度上可以反映藥物在體內(nèi)的療效。盡管所有藥物的含量均在規(guī)定范圍內(nèi)

23、，但有些制劑顯示不完全溶出的特性。藥物的生物利用度取決于藥物的溶解度和溶解速率，尤其是像替米沙坦這類難溶性藥物。差的溶出率可能有差的生物利用度。四種仿制藥(Generic2、5、9、10)在pH4.5、水和pH7.5介質(zhì)中溶出差，且其在這些介質(zhì)溶解度也低，說(shuō)明即使延長(zhǎng)溶出度實(shí)驗(yàn)時(shí)間也不會(huì)改善替米沙坦的溶出。正常人群胃內(nèi)pH值約為1，因此藥物制劑在pH1.2介質(zhì)中的溶出速度可預(yù)測(cè)其在胃中溶出特性。替米沙坦在大鼠胃中吸收很少，食物可減少其吸

24、收量。因此，這些在酸性介質(zhì)中溶出較好而在偏中性介質(zhì)中溶出較差的替米沙坦制劑，當(dāng)胃內(nèi)pH升高時(shí)其生物利用度可能受到影響。
　　賦形劑的種類或比例不同可能導(dǎo)致樣品的溶解度和溶出速率不同。為優(yōu)化替米沙坦制劑工藝，有人比較了不同的堿性物質(zhì)對(duì)替米沙坦制劑的增溶作用存在顯著性差異。不同的賦形劑也可影響片劑的崩解進(jìn)而影響其溶出速率，通常崩解時(shí)限可部分反映藥物的溶出，崩解時(shí)限越長(zhǎng)溶出越慢。即使片劑具有相同的崩解速度，但也可因?yàn)轭w粒分布不均勻?qū)е缕?/p>

25、間的溶出差異大。
　　藥物穩(wěn)定性的差異也是導(dǎo)致藥物含量和藥物溶出度差異的重要因素，特別是藥物儲(chǔ)存于高溫和高濕條件下時(shí)。藥物穩(wěn)定性差可出現(xiàn)藥物的吸水后硬度改變，從而影響制劑的崩解時(shí)限和溶出度。此外，制劑包裝差、氣候的高濕度也是影響藥物制劑在溶出介質(zhì)中溶出差的重要因素，故制劑企業(yè)應(yīng)選用合格的藥物包裝材料。
　　一般而言，藥物是以無(wú)定形物或結(jié)晶形式存在，晶型是影響藥物理化性質(zhì)（如溶解度、穩(wěn)定性等）和活性的重要因素。對(duì)于多晶型藥物，

26、不同的結(jié)晶形式可具有不同的理化特性，通常不定型晶型較穩(wěn)定型晶型溶解度高，生物利用度更高。替米沙坦具有多晶型，分別為A、B、C三種晶型，其中B晶型可轉(zhuǎn)換成更穩(wěn)定的A晶型。各制藥企業(yè)在生產(chǎn)替米沙坦片時(shí)可能使用不同晶型的原材料甚至是多晶型的混合物，這均可能導(dǎo)致溶出的差異。有研究顯示印度四家替米沙坦制藥企業(yè)雖然使用相同晶型（A晶型）的替米沙坦，但卻顯示不同的表面特性和界面現(xiàn)象，這都將影響替米沙坦的溶解度、溶出和生物利用度。目前，替米沙坦多晶型與

27、溶出的關(guān)系仍有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
　　雜質(zhì)是藥物生產(chǎn)或貯藏過(guò)程中引入的化合物，其無(wú)治療作用并可引起不良反應(yīng)，有些不良反應(yīng)甚至危及生命。在原研制劑上市時(shí)，制藥企業(yè)會(huì)提供活性成分、代謝產(chǎn)物及已知雜質(zhì)的毒性研究報(bào)告。但仿制藥由于活性成分的合成路線不同，藥物中引入的雜質(zhì)種類和含量亦可不同。本研究發(fā)現(xiàn):某些替米沙坦制劑中雜質(zhì)的種類和含量均超過(guò)藥典規(guī)定，其制備工藝有待改進(jìn)。雜質(zhì)含量的增加可能會(huì)引起不可預(yù)見(jiàn)的毒副作用，這都將影響藥物的安全性、有

28、效性，甚至引起不必要的藥物相互作用。
　　據(jù)報(bào)道較便宜、低質(zhì)量的活性藥物成分和不適宜賦形劑的應(yīng)用是導(dǎo)致藥品中雜質(zhì)含量增多的重要原因，此外，低水平的生產(chǎn)工藝也是仿制藥雜質(zhì)多的另一個(gè)重要原因。雜質(zhì)的來(lái)源眾多，如原材料、合成過(guò)程中的溶劑殘留、包裝材料等，這些因素在生物等效性試驗(yàn)中并不能反映。與此同時(shí)，一些制藥企業(yè)不遵循藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，藥物制備過(guò)程中所用的原料和輔料未達(dá)到藥用級(jí)別，給藥品質(zhì)量留下安全隱患，因此，評(píng)價(jià)藥物從原料到成品各

29、環(huán)節(jié)的雜質(zhì)含量應(yīng)受到重視。仿制藥企業(yè)需保證所使用的主要成分、輔料和其他材料質(zhì)量合格，生產(chǎn)工藝中不會(huì)引入新的雜質(zhì)。政府和制藥企業(yè)應(yīng)同心協(xié)力切實(shí)貫徹執(zhí)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，確保藥物上市后仍符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。
　　本研究發(fā)現(xiàn)原研藥和70％仿制藥在pH7.5緩沖液和水中溶出較好，有些仿制藥在pH1.2和pH4.5緩沖液中比原研藥的溶出更好。雖然沒(méi)有任何一個(gè)仿制藥在四種介質(zhì)中與原研藥溶出均相似，但總體而言有四個(gè)仿制藥在兩種介質(zhì)中與原研藥的溶出

30、相似。在pH7.5緩沖液和水中三個(gè)仿制藥與原研藥的溶出相似，而在pH1.2緩沖液中有些仿制藥比原研藥溶出更好，10min已基本全部溶出，但溶出也不是越快越好。有三個(gè)仿制藥的雜質(zhì)種類少于原研藥，雜質(zhì)總含量與原研藥基本一致。
　　四個(gè)仿制藥(Generics2、5、9、10)溶出曲線與原研藥的溶出曲線不具備可比性，在所有介質(zhì)中均存在較大差異，只在pH1.2緩沖液中迅速溶出，其他介質(zhì)中基本不溶出。同時(shí)，此四個(gè)仿制藥雜質(zhì)含量也相對(duì)較多，其

31、中兩個(gè)仿制藥雜質(zhì)含量超出國(guó)家限度，這提示此四個(gè)仿制藥的質(zhì)量有待進(jìn)一步商榷。
　　本研究具有一定的局限性，體外溶出度試驗(yàn)并不能完全反映體內(nèi)生物利用度。即使溶解性好的藥物在體內(nèi)的生物利用度也不一定好，相應(yīng)的體外溶出差的藥物其體內(nèi)生物利用度不一定差，故仍需開展體內(nèi)生物利用度研究。藥物的儲(chǔ)存條件和儲(chǔ)存時(shí)間也是影響藥物溶出的重要因素，但有四個(gè)仿制藥出現(xiàn)pH依賴的溶出特性說(shuō)明這種影響的可能性小。本文未對(duì)制劑中的雜質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證定性研究，需對(duì)替