醛固酮瘤術(shù)后持續(xù)性高血壓患者臨床特點(diǎn)及差異表達(dá)基因研究.pdf

1、背景：
　　原發(fā)性醛固酮增多癥(primary aldosteronism，PA)，簡(jiǎn)稱原醛癥，是一種常見(jiàn)的、可治愈的繼發(fā)性高血壓的原因之一，主要是以腎上腺皮質(zhì)自主分泌過(guò)多醛固酮為特征，部分患者伴有低鉀血癥，其病因主要是特發(fā)性醛固酮增多癥（idiopathic hyperaldosteronism， IHA）和醛固酮瘤(aldosterone-producingadenoma，APA)，約占原醛癥的90％。據(jù)估計(jì)，原醛患者約占所有

2、高血壓患者的6％～12％，占難治性高血壓患者的20％。既往研究發(fā)現(xiàn)，原醛患者經(jīng)單側(cè)腎上腺切除后約30％～72％的患者術(shù)后高血壓可恢復(fù)正常，然而，目前有關(guān)APA術(shù)后持續(xù)性高血壓的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。隨著人類基因組計(jì)劃的完成，高通量的基因芯片技術(shù)迅速發(fā)展。基因芯片技術(shù)，又被稱為cDNA微陣列(cDNAmicroarray)，主要采用微陣列的方式，把許多高密度寡核苷酸、基因片段固定在硅片、玻片和尼龍膜等介質(zhì)上，可用來(lái)檢測(cè)特定基因的表達(dá)，其原理主

3、要是數(shù)百個(gè)甚至數(shù)千個(gè)探針與靶基因相互作用后的互補(bǔ)雜交?；蛐酒夹g(shù)具有準(zhǔn)確、快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可用于研究基因表達(dá)與疾病的關(guān)系、基因突變、基因多態(tài)性和基因測(cè)序等方面。
　　目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為APA術(shù)后持續(xù)性高血壓的發(fā)生是由多因素共同作用形成的，許多研究者在總結(jié)了APA術(shù)后持續(xù)性高血壓患者臨床特征后發(fā)現(xiàn)，女性、使用較少的降壓藥物和短的高血壓病程和術(shù)后高血壓治愈有關(guān)。而目前國(guó)內(nèi)、外有關(guān)APA術(shù)后持續(xù)性高血壓發(fā)病的遺傳機(jī)制研究較少，大

4、多數(shù)研究主要是研究APA發(fā)病機(jī)制有關(guān)的差異表達(dá)基因篩選、基因突變檢測(cè)和基因多態(tài)性分析研究上。以往研究在比較了APA腺瘤組織與正常腎上腺后發(fā)現(xiàn),CYP11B2、CAMK-I、CYP11B1與APA發(fā)病或術(shù)后持續(xù)性高血壓的發(fā)病相關(guān)。而對(duì)APA術(shù)后持續(xù)性高血壓發(fā)生的遺傳機(jī)制研究較少，如今還沒(méi)有專門(mén)比較APA行單側(cè)腎上腺切除術(shù)后持續(xù)性高血壓患者和術(shù)后血壓正常者之間腺瘤組織內(nèi)表達(dá)差異基因方面的研究。
　　目的:
　　1、探討APA患者

5、單側(cè)腎上腺切除術(shù)后持續(xù)性高血壓患者的臨床特點(diǎn)。
　　2、在全基因組范圍內(nèi)篩選APA行單側(cè)腎上腺切除術(shù)后，持續(xù)性高血壓患者和術(shù)后血壓正常者腺瘤組織內(nèi)差異表達(dá)的基因，建立差異表達(dá)基因譜，為探討APA術(shù)后持續(xù)性高血壓發(fā)病的遺傳學(xué)機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　3、在基因芯片篩選出的差異表達(dá)基因基礎(chǔ)上，對(duì)在醛固酮瘤術(shù)后持續(xù)性高血壓患者差異表達(dá)的基因，用qRT-PCR及免疫組織化學(xué)的方法進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)一步驗(yàn)證差異表達(dá)的基因和基因芯片結(jié)果的可靠性

6、。
　　方法:
　　1、回顧性分析了94例行單側(cè)腎上腺切除術(shù)APA患者臨床特征，按術(shù)后血壓恢復(fù)情況分為2組:術(shù)后血壓正常組（51例）和術(shù)后持續(xù)性高血壓組(43例)。分析手術(shù)前、后患者的臨床資料特征:包括術(shù)前高血壓家族史、高血壓病程、降壓藥使用種類、人體測(cè)量學(xué)指標(biāo)及生化指標(biāo)等。
　　2、采用高通量的基因芯片Human Transcriptome Array2.0，對(duì)9例APA術(shù)后持續(xù)性高血壓患者和12例術(shù)后血壓正常者進(jìn)行

7、差異表達(dá)基因篩選，并對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行GO富集分析、Pathway富集分析和mRNA-ncRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建。
　　3、與術(shù)后血壓正常組相比，采用qRT-PCR方法，選取由基因芯片篩選出的9個(gè)差異表達(dá)的基因在40倒APA患者中進(jìn)行RNA水平的檢測(cè);同時(shí)采用免疫組織化學(xué)的方法，選擇4個(gè)差異表達(dá)的基因在12例APA患者中進(jìn)行蛋白水平的檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1、與APA患者術(shù)后血壓正常組相比，兩組在手術(shù)時(shí)的年齡、性別比

8、、高血壓家族史、術(shù)前血壓水平、術(shù)前血醛固酮、腎素活性、ARR值、血肌酐、24h尿醛固酮和24h尿鉀、甘油三酯、總膽固醇水平無(wú)顯著差異;BMI、高血壓病程、術(shù)前使用≥2種降壓藥物和低密度脂蛋白水平與術(shù)后持續(xù)性高血壓發(fā)生有關(guān)(P＜0.05)。矯正了BMI和高血壓病程后Logistic回歸分析顯示:術(shù)前使用≥2種降壓藥物(OR:2.758，P＜0.05)和低密度脂蛋白水平(OR:2.206，P＜0.05)是術(shù)后持續(xù)性高血壓發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

9、
　　2、與APA術(shù)后血壓正常組相比，在術(shù)后持續(xù)性高血壓患者中共發(fā)現(xiàn)了99條差異表達(dá)的基因，其中48個(gè)mRNA和51個(gè)ncRNA。GO富集分析表明:差異表達(dá)基因的功能與細(xì)胞分化、脂質(zhì)代謝過(guò)程、胞外區(qū)、細(xì)胞膜、金屬離子結(jié)合和跨膜受體活性有關(guān)。Pathway分析發(fā)現(xiàn):甘油磷脂的代謝途徑、類固醇的生物合成途徑、乙醚脂代謝、亞油酸代謝和a-亞麻酸代謝途徑在持續(xù)性高血壓患者中出現(xiàn)了富集;mRNA-ncRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖包括了48個(gè)節(jié)點(diǎn)和72

10、個(gè)連接。
　　3、QRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示:COLEC12、 FABP4、CST2、FAT1和MGP基因在術(shù)后持續(xù)性高血壓組內(nèi)的RNA水平表達(dá)具有顯著性差異;免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:COLEC12、 FABP4、FAT1和MGP在兩組間表達(dá)同樣具有顯著性差異，與基因芯片結(jié)果一致。
　　結(jié)論:
　　1、本研究中APA患者行單側(cè)腎上腺切除術(shù)后，高血壓的恢復(fù)率為54.3％，術(shù)后持續(xù)性高血壓的發(fā)生與BMI、高血壓病程、術(shù)前使用

11、≥2種降壓藥物和低密度脂蛋白水平相關(guān)，術(shù)前使用≥2種降壓藥物和高水平低密度脂蛋白是術(shù)后持續(xù)性高血壓發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　2、與APA術(shù)后血壓正常者相比，在術(shù)后持續(xù)性高血壓患者腺瘤組織中存在著差異表達(dá)的基因譜，提示差異表達(dá)的基因可能與APA術(shù)后持續(xù)性高血壓的發(fā)生有關(guān)，這為下步進(jìn)行差異表達(dá)基因的功能研究打下了基礎(chǔ)。
　　3、QRT-PCR和免疫組織化學(xué)方法進(jìn)一步驗(yàn)證了差異表達(dá)的基因，提示COLEC12、FABP4、FAT1和