版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:研究神經(jīng)軸突導向因子netrin-1 及其受體UNC5B 在體外微血管模型的作用。檢測netrin-1 受體在人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)與新生血管化角膜中的表達差異。分析軸突導向因子netrin-1對角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的作用。
方法:
1. 體外實驗:原代培養(yǎng)HU
2、VECs,檢測不同濃度(10ng/ml-5000ng/ml)netrin-1作用72 小時后對HUVECs增殖活性(CCK-8法)與遷移能力(Transwell 小室)的影響。構建體外二維微血管模型,光鏡下觀察不同濃度netrin-1對體外微血管管腔形成的影響。采用RT-PCR檢測HUVECs中netrin-1所有已知受體,包括UNC5A、UNC5B、UNC5C、UNC5D、DCC 及neogenin 共6種受體表達情況。構建UNC5B
3、shRNA 重組質(zhì)粒,通過脂質(zhì)體Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染HUVECs,檢測不同濃度(10ng ng/ml-5000ng/ml)netrin-1作用72 小時后對對UNC5B 沉默后HUVECs增殖活性與遷移能力的影響。光鏡下觀察不同濃度netrin-1對UNC5B 沉默后體外二維微血管模型中管腔形成的影響。
2. 體內(nèi)實驗:60只SD大鼠,按隨機數(shù)字表法隨機均分成A、B、C、D、E和F組,每組10只鼠(10
4、只眼)。采用角膜微囊袋法制作角膜新生血管模型,其中A、B、C、D 及E組除植入明膠海綿+瓊脂糖膠丸外分別再加入堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)(50ng/ul)、netrin-1(100ug/ml)、bFGF+netrin-1(100ug/ml)、netrin-1(5000ug/ml)、bFGF+netrin-1(5000ug/ml),對照組(F組)只含明膠海綿+瓊脂糖膠丸
5、。植入藥丸后每日裂隙燈顯微鏡下觀察CNV的生長情況,并照相分析。在造模后7d和21d 每組各處死5只鼠,取全角膜作病理學分析。對于b-FGF誘導的大鼠角膜新生血管模型,采用實時熒光定量PCR法檢測新生血管化角膜與正常角膜中UNC5A、UNC5B、UNC5C、UNC5D、DCC 及neogenin 共6種netrin-1 已知所有受體表達情況。
結(jié)果:
1. 體外實驗:Netrin-1 濃度低于500ng/ml
6、時,促進HUVECs的增殖和遷移;而netrin-1濃度在1000 ng/ml-5000ng/ml時,抑制HUVECs的增殖和遷移。其中netrin-1為50ng/ml時,HUVECs的增殖能力最強;netrin-1 濃度為100ng/ml時,HUVECs的遷移能力最強。體外微血管模型顯示在濃度低于500ng/ml時,netrin-1對于血管腔形成沒有影響,而當濃度為1000ng/ml-5000ng/ml時,netrin-1 抑制血管腔
7、的形成,且抑制作用呈劑量依賴性。HUNECs中netrin-1 受體家族只有UNC5B 一種受體表達。經(jīng)酶切和測序鑒定,本課題構建了UNC5B特異性shRNA的重組質(zhì)粒,并成功轉(zhuǎn)染HUVECs。UNC5B 干擾組HUVECs的增殖能力比對照組增強(P<0.05)。UNC5B 干擾組netrin-1 使HUVECs的增殖與遷移能力增強,而不表現(xiàn)出抑制作用。體外血管模型中,靶向干擾UNC5B基因后,無論netrin-1 濃度多少,其對血管腔
8、的抑制作用均消失。
2. 體內(nèi)實驗:角膜微囊袋法新生血管模型顯示實驗組A 在4d 左右可見新生血管從角膜緣向植入物成束局限生長,7d 左右達到高峰,3 周左右完全消退。7 d時各組新生血管面積比較,B組面積與A組相近,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。C組顯著高于A、B組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。D、E、F組顯著低于A組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。大鼠角膜中netrin-1 受體家族中只有UNC5B和Ne
9、ogenin兩種受體表達,其中正常角膜中UNC5B的表達低于Neogenin。新生血管化角膜中UNC5B的表達高于Neogenin。
結(jié)論:Netrin-1對體外微血管管腔形成具有促進和抑制的雙重調(diào)控作用,表現(xiàn)為低濃度促進而高濃度抑制。HUVECs中netrin-1 受體家族只有UNC5B 一種受體表達。
RNA干擾實驗顯示UNC5B 在導向血管生長中是一種抑制性受體,沉默UNC5B基因后促進HUVECs增值
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 軸突導向因子Netrin-1在肺癌血管擬態(tài)和血管新生中的作用及機制的初步研究.pdf
- 軸突導向因子Netrin-1在神經(jīng)再生及缺血后組織修復中的作用研究.pdf
- 軸突導向因子Netrins對角膜新生血管和炎癥的作用研究.pdf
- 軸突導向因子netrin-1在先天性巨結(jié)腸中表達分布及意義.pdf
- 軸突導向因子-1對胎盤血管形成作用的研究.pdf
- 軸突導向因子Slit及其受體Robo在損傷周圍神經(jīng)的表達及其功能.pdf
- 可吸收生物材料復合他克莫司及NETRIN-1因子制備軸突導向神經(jīng)鞘管的實驗研究.pdf
- 軸突導向因子-1mRNA在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中的表達.pdf
- 家蠶神經(jīng)軸突導向因子Robo的功能研究.pdf
- 抗神經(jīng)導向因子netrin-1受體-UNC5B單克隆抗體的制備和功能研究.pdf
- Netrin-1在小鼠大腦中動脈缺血中的促血管新生作用.pdf
- NetriN-1及其受體在人難治性顳葉癲癇中作用機制的實驗研究.pdf
- 軸突導向因子-1蛋白在氧誘導視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜中的表達.pdf
- 大鼠脊髓損傷后軸突導向因子slit-2的表達變化及意義.pdf
- 神經(jīng)軸突導向因子受體4和長鏈非編碼RNA TUG1調(diào)控血腫瘤屏障通透性和膠質(zhì)瘤血管新生的機制研究.pdf
- 基質(zhì)細胞衍生因子-1及其受體在脈絡膜新生血管形成中的作用.pdf
- 慢病毒介導的Netrin-1小發(fā)夾狀RNA在視網(wǎng)膜新生血管形成中的調(diào)控作用.pdf
- 神經(jīng)軸突導向分子Semaphorin 5A在人胃癌中表達、作用及其分子機制的研究.pdf
- Netrin-1基因?qū)μケP血管生成作用的體內(nèi)、外研究.pdf
- Ryk通過調(diào)控PCP信號通路介導神經(jīng)元軸突導向作用.pdf
評論
0/150
提交評論