晚期糖基化終產(chǎn)物對心肌細(xì)胞胞內(nèi)游離鈣濃度的影響及其機(jī)制.pdf

1、研究背景：晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs，又稱糖基化終極產(chǎn)物)是體內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基部分、脂類或核酸與還原糖的羰基在無酶的條件下發(fā)生反應(yīng)，形成Schiff堿，經(jīng)Amadori反應(yīng)重排后形成的相對穩(wěn)定的糖基化產(chǎn)物，近年對其研究表明，AGEs在動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病心肌病等疾病發(fā)生中起重要作用且與Ⅰ型糖尿病人左室舒張功能減退有關(guān)。早期的研究工作發(fā)現(xiàn)了AGEs可以明顯增加心肌細(xì)胞的凋亡率，并與時(shí)間、劑量呈正相關(guān)，抗晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE

2、)抗體以及P38MAPK抑制劑SB203580可以阻滯這種作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)AGEs孵育可以引起心肌細(xì)胞自分泌血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)增加，AngⅡ受體AT1拮抗劑絡(luò)沙坦可以拮抗AGEs誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的作用，并發(fā)現(xiàn)了在慢性腎功能衰竭的SD大鼠模型，慢性外源性AGEs灌注可導(dǎo)致心臟左室舒張功能減退。AGEs對心肌細(xì)胞的損傷中是否牽涉到胞內(nèi)游離鈣離子濃度的改變及其作用機(jī)制的研究尚少見，探明AGEs對心肌細(xì)胞胞內(nèi)游離鈣的作用及其機(jī)制可能為臨床治

3、療提供新的靶點(diǎn)。 目的：以體外培養(yǎng)的SD乳鼠心肌細(xì)胞(CMs)為對象，應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)、熒光鈣離子指示劑Fluo-3/AM和激光共聚焦顯微鏡(LSCM)技術(shù)、免疫印跡等方法測定AGEs刺激對培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞胞內(nèi)游離鈣濃度的變化及肌漿網(wǎng)2型鈣泵(SERCA2)、蘭尼堿受體(RyRs)、受磷蛋白的表達(dá)的影響，以及幾種可以調(diào)控鈣通道的物質(zhì)(如胞膜L型鈣通道阻滯劑維拉帕米、RyRs阻滯劑普魯卡因、肌漿網(wǎng)IP3受體拮抗劑肝素、SERCA2阻

4、滯劑毒胡蘿卜素)和幾種抑制心肌細(xì)胞凋亡的物質(zhì)(如抗RAGE抗體、P38MAPK抑制劑SB203580、AngⅡ受體AT1拮抗劑絡(luò)沙坦)的干預(yù)作用，試圖回答AGEs對心肌細(xì)胞胞內(nèi)游離鈣的影響和可能的機(jī)制及有效干預(yù)措施，為進(jìn)一步闡明AGEs引起的心肌細(xì)胞凋亡提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 結(jié)論: 一、AGEs刺激以劑量依賴的方式使心肌細(xì)胞胞內(nèi)游離鈣濃度升高，這個(gè)作用是通過心肌細(xì)胞膜表面晚期糖基化終產(chǎn)物受體介導(dǎo)的。抗RAGE抗體可以阻斷其作用

5、。 二、AGEs引起的胞內(nèi)游離鈣升高主要是胞內(nèi)鈣庫肌漿網(wǎng)釋放所致，是由IP3受體介導(dǎo)的。維拉帕米對其無阻斷作用，普魯卡因增強(qiáng)其作用，肝素和Thapsigargin可以阻斷其作用。 三、P38MAPK和血管緊張素Ⅱ參與了AGEs引起的胞內(nèi)游離鈣升高，SB203580和絡(luò)沙坦可以部分阻斷AGEs的作用。 四、高濃度AGEs環(huán)境可以改變心肌細(xì)胞對血管緊張素Ⅱ的反應(yīng)，顯著延長血管緊張素Ⅱ刺激引起的心肌細(xì)胞胞內(nèi)游離鈣升高的