精子相關(guān)抗原SPAG6與TAC1和TCTE3蛋白相互作用關(guān)系的探討.pdf

1、目的：探討精子相關(guān)抗原SPAG6與TAC1和TCTE3之間是否存在相互作用。
　　方法：提取健康成年雄性小鼠（18-20g)睪丸、腦、肝、腎、心、肺、脾、肌肉8種組織的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，設(shè)計(jì)小鼠TacJ與Tcte3的特異性引物，PCR法觀察Tael及Tcte3在各組織中的表達(dá)；以小鼠睪丸組織cDNA為模版，PCR擴(kuò)增Tael和Tcte3序列，構(gòu)建Tacl/pGADT7、Tacl/pEGFPN2、Tcte3/pGADT7、

2、Tcte3/pEGFPN2的重組質(zhì)粒，將含有pEGFP-N2載體的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO細(xì)胞和C0S-1細(xì)胞中，采用免疫熒光染色及Western Blot檢測(cè)TAC1和TCTE3在細(xì)胞中的定位和蛋白表達(dá)。將Tacl/pGADT7、Tcte3/pGADT7與SPAG6/PGBKT7進(jìn)行酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，提取酵母蛋白，Western Blot檢測(cè)TAC1與SPAG6、TCTE3與SPAG6之間是否存在相互作用。
　　結(jié)果：主要在睪丸、腦、心臟

3、中表達(dá)，在睪丸、腦、肝、腎、肺、脾、肌肉中均有表達(dá)。酶切和測(cè)序鑒定表明，Tacl/pGADT7、Tacl/pEGFPN2、Tcte3/pGADT7、Tcte3/pEGFPN2的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TAC1和TCTE3分別表達(dá)于整個(gè)胞體和胞漿，當(dāng)共轉(zhuǎn)染SPAG6質(zhì)粒后，TAC1及 TCTE3的定位均被轉(zhuǎn)移至細(xì)胞微管中。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)顯示TAC1/SPAG6和TCTE3/SPAG6組合在缺少三種氨基酸（Leu、Trp、His)的培