內(nèi)源性心肌保護措施對離體大鼠心臟鈣調(diào)節(jié)蛋白和再灌注心律失常的影響.pdf

1、第一部分:七氟烷后處理與延遲相遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理在心臟保護中鈣調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)差異
　　目的:
　　鈣調(diào)節(jié)蛋白——L型鈣通道(L-type Ca2+ channels，LTCCs)、蘭尼堿受體2(ryanodine receptor isoform2，RyR2)以及鈉鈣交換體1(Na+/Ca2+ exchanger isoform1，NCX1)被認(rèn)為心肌缺血再灌注損傷的重要保護機制。七氟烷后處理(sevofluranepostco

2、nditioning，SevoPoC)以及延遲相遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理(delayed remote ischemicpreconditioning，DRIPC)均可以減輕缺血再灌注損傷保護心臟。本研究利用離體大鼠心臟灌注模型探討三種鈣調(diào)節(jié)蛋白在SevoPoC和DRIPC中的表達(dá)。
　　方法:
　　血流動力學(xué)穩(wěn)定（平衡期）30min后，以缺血30min復(fù)灌60min建立缺血再灌注損傷模型，40只SD大鼠隨機分入以下4組，每組10只:

3、(1)時間對照組(Time control，TC):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液120min;(2)缺血再灌注組（Ischemia/reperfusion，I/RI）:離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液30min后，停止灌注30min，恢復(fù)灌注60min;(3)七氟烷后處理組(SevoPoC):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液30min后，停止灌注30min，在復(fù)灌即刻使用含3％的七氟烷持續(xù)灌注10min，然后使用氧合的KH液灌注50

4、min;(4)延遲相遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理組（DRIPC）:在游離心臟前一天，SD大鼠麻醉（烏拉坦，1.5g/kg，腹腔注射）后在單側(cè)后肢以壓脈帶行四個周期的間斷缺血復(fù)流(4×5min/5min)，肢端缺血經(jīng)過改良的脈搏氧監(jiān)測儀進(jìn)行確認(rèn)。觀察SevoPoC(3％ v/v)和DRIPC的效果。各實驗組均持續(xù)監(jiān)測心率(heartrate，HR)，左心室發(fā)展壓(left ventricular developed pressure，LVDP)，最大L

5、VDP上升速率(+dp/dt)及最大LVDP下降速率(-dp/dt)。檢測心肌梗死面積和冠脈流出液肌鈣蛋白Ⅰ(Cardiac troponinⅠ，cTnⅠ)水平。分別用蛋白印跡法和RT-PCR檢測LTCCs，、RyR2以及NCX1的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果:
　　SevoPoC和DRIPC均能明顯加快LVEDP，RPP和±dp/dt向基線水平恢復(fù)。與SevoPoC相比，DRIPC組的RPP下降更加明顯(P＜0.05)。同時

6、，兩者可以降低心肌缺血再灌注損傷后肌鈣蛋白Ⅰ的釋放。相比于DRIPC，SevoPoC減少缺血再灌注損傷引起的心肌梗死面積效果更加顯著(16.50％±4.54％vs22.34％±4.02％，P＜0.001)。SevoPoC，而不是DRIPC能夠更加明顯地抑制NCX1的激活(0.59±0.09，I/RI組vs0.32±0.16, SevoPoC組，P＜0.01;vs0.57±0.14 DRIPC組，P＞0.05)。 LTCCs以及RyR2的

7、表達(dá)在兩組間并無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　SevoPoC和DRIPC可以提供相似的心肌保護作用，表現(xiàn)在心功能恢復(fù)的增強、冠脈流出液cTnⅠ釋放以及心肌梗死面積的減少。然而，在鈣調(diào)節(jié)蛋白的調(diào)節(jié)方面，SevoPoC降低NCX1活性的效果更加顯著。
　　第二部分:七氟烷預(yù)處理與七氟烷后處理在心臟保護中鈣調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)差異以及對再灌注心律失常的影響
　　目的:
　　1.比較L型鈣通道(LTCCs)、蘭尼堿受體2

8、(RyR2)以及鈉鈣交換體1(NCX1)在七氟烷預(yù)處理與七氟烷后處理心臟保護作用中的異同;
　　2.觀察七氟烷預(yù)處理與七氟烷后處理對離體大鼠心肌再灌注心律失常的影響，并探索其相關(guān)機制;
　　方法:
　　在血流動力學(xué)穩(wěn)定30min后，以缺血20 min復(fù)灌60min建立缺血再灌注損傷模型，50只SD大鼠隨機分入以下5組，每組10只:(1)時間對照組(Time control，TC):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液11o

9、min;(2)缺血/再灌注組(Ischemia/reperfusion，I/RI):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液30min，停止灌注20min，恢復(fù)灌流60min;(3)七氟烷預(yù)處理組(sevoflurane preconditioning，SevoPC):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液15min，使用含3％七氟烷飽和的KH液持續(xù)灌注15min，停止灌注20min，恢復(fù)灌流60min;(4)七氟烷后處理組(sevofluranep

10、ostconditioning，SevoPoC):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液30min，停止灌注20min，在復(fù)灌即刻使用含3％七氟烷飽和的KH液持續(xù)灌注15min，然后使用氧合的KH液灌注45min;(5)七氟烷聯(lián)合處理組(sevoflurane preconditioning+sevoflurane postconditioning，PCPo):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液15min，使用含3％七氟烷飽和的KH液持續(xù)灌注1

11、5min，停止灌注20min，在復(fù)灌即刻使用含3％七氟烷飽和的KH液持續(xù)灌注15min，然后使用氧合的KH液灌注45min。觀察SevoPC和SevoPoC的效果。各實驗組均持續(xù)監(jiān)測心率(HR)，左心室發(fā)展壓(LVDP)，最大LVDP上升速率(+dp/dt)及最大LVDP下降速率(-dp/dt)。檢測心肌梗死面積和冠脈流出液肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平并監(jiān)測記錄再灌注心律失常。分別用蛋白印跡法和RT-PCR檢測LTCCs，、RyR2以及N

12、CX1的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果:
　　1.與I/RI組相比，SevoPC組、SevoPoC組、PCPo組的離體心臟在再灌注30min及60min的LVDP、+dp/dt、-dp/dt以及HR均降低(P＜0.05)，LVEDP升高(P＜0.05)。SevoPC和SevoPoC均能降低由I/RI造成的心肌梗死(17.92％±2.12％，SevoPC組;17.22％±2.30％，SevoPoC組;vs23.83％±2.07％，

13、 I/R組， P＜0.05);相對于單獨運用SevoPC和SevoPoC，聯(lián)合二者(PCPo)降低心肌梗死面積的效果更加明顯(P＜0.001)。與TC組相比，I/RI組再灌注終點時cTnⅠ水平明顯升高(P＜0.001)。SevoPC和SevoPoC均能減少cTnⅠ的釋放（P＜0.001 vs I/RI組）。SevoPC和SevoPoC再灌注終點時cTnⅠ水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.與I/RI組相比，SevoPC

14、和SevoPoC能夠顯著減少VPB的個數(shù)，縮短VT和VF的發(fā)作時程，降低VF的發(fā)生率，并且能夠降低再灌注心律失常評分。
　　3.在鈣調(diào)節(jié)蛋白方面，在SevoPC組，RyR2的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平顯著降低;在SevoPoC組，LTCCs，RyR2及NCX1的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平顯著降低，RyR2及NCX1在翻譯水平的表達(dá)顯著降低。
　　結(jié)論:
　　1.SevoPC及SevoPoC能夠改善MIRI后的心功能，兩者在改善改善MIRI后的

15、心功能方面并無明顯差異。SevoPC和SevoPoC均能降低心肌cTnⅠ的釋放，降低由I/RI造成的心肌梗死，相對于單獨運用SevoPC和SevoPoC，聯(lián)合二者降低心肌梗死面積的效果更加明顯。
　　2.SevoPC及SevoPoC能改善離體大鼠心臟的再灌注心律失常發(fā)生。
　　3.SevoPC及SevoPoC對再灌注心律失常的作用可能與其對LTCCs，RyR2及NCX1的抑制有關(guān)。
　　4.在鈣調(diào)節(jié)蛋白方面，SevoP