mir-126調(diào)控VEGF與卵巢癌細(xì)胞侵襲相關(guān)的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　卵巢癌是婦科常見腫瘤之一，其早期癥狀隱匿，因此大多數(shù)卵巢癌患者在確診時已經(jīng)是癌癥晚期。卵巢癌具有較強的惡性生物學(xué)行為，易發(fā)生腹腔內(nèi)的廣泛種植，已成為影響婦女生命的最主要的腫瘤之一。miRNA是真核細(xì)胞內(nèi)的非編碼微小RNA，大量研究表明miRNA與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其可能發(fā)揮著抑癌基因或癌基因的作用。miR-126是作為一種特異性表達(dá)的microRNA，它能夠通過調(diào)控VEGF等基因的表達(dá)參與調(diào)控血管

2、發(fā)育，新生血管形成以及血管炎癥反應(yīng)等血管的生理和病理生理過程。研究表明miR-126可以抑制多種腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移,如肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌等，提示miR-126可能具有潛在的抑癌基因作用。腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤新生血管的形成密不可分，而VEGF是腫瘤血管生成中特異性的促血管生成因子，其具有很強的促進(jìn)腫瘤新生血管形成的能力。已有研究表明miR-126可以抑制VEGF的表達(dá)，是VEGF表達(dá)的調(diào)控因子，但其在卵巢癌中的作用尚未闡明。本研究通過體外

3、培養(yǎng)SKOV3卵巢癌細(xì)胞株，同時轉(zhuǎn)染miR-126的基因片段，以揭示miR-126靶向調(diào)控VEGF在卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。
　　研究材料和方法
　　培養(yǎng)人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞株SKOV3，通過慢病毒包裝miR-126轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞系，將其分為三組:轉(zhuǎn)染miR-126表達(dá)組（SKOV3/LV3-has-miR-126組）、轉(zhuǎn)染陰性對照組(SKOV3/LV3NC組)和空白對照組（SKOV3組），用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)

4、胞的細(xì)胞周期，通過Transwell侵襲實驗觀察各組細(xì)胞的侵襲能力，分析miR-126與細(xì)胞周期及卵巢癌細(xì)胞侵襲能力的關(guān)系。并通過免疫熒光、Western Blot比較各組細(xì)胞VEGF表達(dá)量的差別，分析miR-126與VEGF表達(dá)的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.SKOV3組、SKOV3/LV3NC組、SKOV3/LV3-has-miR-126組S期細(xì)胞平均比例分別為63.9％、53.1％和34.7％，而G1細(xì)胞比例SKOV3組

5、和SKOV3/LV3NC組相近;與SKOV3組和SKOV3/LV3NC組細(xì)胞任一組比較，SKOV3/LV3-has-miR-126組的細(xì)胞S期增殖指數(shù)較低而停留在G1的細(xì)胞比例則較高，表明miR-126過表達(dá)后，細(xì)胞S期合成顯著抑制。
　　2.Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示SKOV3細(xì)胞侵過基質(zhì)膠的穿膜細(xì)胞數(shù)在SKOV3組細(xì)胞中是248±16。與SKOV3組細(xì)胞相比較，轉(zhuǎn)染陰性對照組SKOV3/LV3NC細(xì)胞侵過基質(zhì)膠的穿膜細(xì)

6、胞數(shù)沒有明顯改變(250±15，P＞0.05)，轉(zhuǎn)染LV3-has-miR-126組細(xì)胞侵過基質(zhì)膠的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少(169±12，P＜0.05)。
　　3.免疫熒光和Western Blot實驗顯示SKOV3組與SKOV3/LV3NC組的細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá)量相近，其蛋白相對表達(dá)量分別為（71.3±2.7％和70.6±2.3％;與SKOV3組與SKOV3/LV3NC組的細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá)量相比，SKOV3/LV3-has

7、-miR-126組細(xì)胞VEGF蛋白的相對表達(dá)量則為32.4±4.2％，其表達(dá)量明顯比SKOV3組減少(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.miR-126轉(zhuǎn)染的SKOV3卵巢癌細(xì)胞S期合成顯著抑制，G1期細(xì)胞明顯增加，同時侵過基質(zhì)膠的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少，提示miR-126的表達(dá)可抑制卵巢癌的增殖和侵襲。
　　2.miR-126轉(zhuǎn)染的SKOV3卵巢癌細(xì)胞可抑制VEGF的表達(dá)，提示miR-126抑制卵巢癌的增殖和侵襲可能與