產(chǎn)10-HDA菌株的改良及發(fā)酵調(diào)控.pdf

1、10-羥基-2-癸烯酸(10-Hydroxy-2-DecenoicAcid，10-HDA)是一種迄今為止僅在蜂王漿中發(fā)現(xiàn)的不飽和脂肪酸。10-HDA具有抗菌、抗?jié)冏饔?、增?qiáng)免疫力、抗癌、抗腫瘤作用、降血脂作用。因此10-HDA具有極高的醫(yī)藥保健價(jià)值，得到越來越多的關(guān)注，本論文主要研究內(nèi)容是通過誘變，改變出發(fā)菌株QYW522產(chǎn)量低且不穩(wěn)定的現(xiàn)狀，并對(duì)搖瓶發(fā)酵條件進(jìn)行探討和優(yōu)化，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究50L發(fā)酵罐的發(fā)酵條件。 通過比

2、較實(shí)驗(yàn)，從紫外線誘變、紫外復(fù)合氯化鋰誘變、亞硝酸誘變、微波誘變四種誘變方法中，選擇正突變率較高的紫外線復(fù)合氯化鋰誘變作為下一步QYW522原生質(zhì)體誘變的主要方法。 論文研究了出發(fā)菌株QYW522原生質(zhì)體制備的影響因素，確定了原生質(zhì)體最佳的形成條件：1％溶菌酶，1.5％蝸牛酶，1％纖維素的酶系統(tǒng)；滲透壓穩(wěn)定劑為0.8mol/LMgSO4；菌齡為30h；酶解溫度為33℃；酶解時(shí)間為3h。 通過薄層初篩，從高滲再生培養(yǎng)基上共獲

3、得73株較有潛力的菌株，最終選擇提高率較高的8株突變株進(jìn)行下一步復(fù)篩。搖床復(fù)篩，高效液相色譜法檢測發(fā)酵液中10-HDA的含量，最終篩選出一株產(chǎn)量相對(duì)出發(fā)菌株提高較多的突變株Uv90s-29。 對(duì)突變株Uv90s-29進(jìn)行形態(tài)特征觀察，依據(jù)《真菌鑒定手冊(cè)》和相關(guān)書籍，初步認(rèn)為該菌屬于半知菌門(FungiImperfecti)叢梗孢目(Moniliales)，叢梗孢科(Moniliaceae)，曲霉族(Aspergillase)，曲

4、霉屬(AspergillusMich.exFr)，黃-米曲霉組(A.Flavus-oryzae)疏展曲霉(A.EffususTiraboschi)。 論文通過單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)合正交實(shí)驗(yàn)對(duì)突變株Uv90s-29的搖瓶發(fā)酵條件進(jìn)行摸索，確定了碳源是10-HDA最主要的影響因素，其次為氮源，最后是無機(jī)鹽，最佳培養(yǎng)條件是：接種量為10％，菌齡30h，初始pH為6.0，30℃、220r/min搖床培養(yǎng)72h。 在搖瓶培養(yǎng)條件研究的基礎(chǔ)