六種食源性致病微生物PCR檢測(cè)及固相化試劑盒的研究.pdf

1、食品安全是一個(gè)重大的世界性公共衛(wèi)生問題，不僅影響到人們的健康，更是關(guān)系到國計(jì)民生的大事，越來越受到人們的重視，其中細(xì)菌性食物中毒是引起食源性疾病的主要因素。傳統(tǒng)的細(xì)菌檢測(cè)方法耗時(shí)長，操作繁瑣，越來越不能滿足實(shí)際檢測(cè)的需要。
　　本研究通過設(shè)計(jì)食源性致病微生物的特異性引物、DNA提取方法的優(yōu)化、以及退火溫度和Mg2+濃度等PCR主要反應(yīng)條件優(yōu)化后，建立了沙門氏菌（Salmonella spp.）、單核細(xì)胞增生性李斯特菌（Lister

2、ia monocytogenes）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、志賀氏菌（Shigella spp.）、大腸桿菌O157：H7（Escherichia coli O157:H7）和蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）的單重及多重PCR檢測(cè)體系。擴(kuò)增結(jié)果表明這6株致病菌均有清晰、特異的目標(biāo)條帶，經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證其同源性高達(dá)99％，DNA靈敏度可達(dá)pg級(jí)。因此，本研究建立的PCR檢測(cè)體系特異性強(qiáng)、靈敏度

3、高。同時(shí)以國標(biāo)法為對(duì)照，對(duì)人為接種致病菌的牛奶樣品、生牛肉以及市場采集的200份樣品進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，采用多重PCR方法簡單快速且靈敏度高，整個(gè)檢測(cè)時(shí)間在24 h以內(nèi)，在肉品中的檢測(cè)靈敏度可達(dá)1 CFU/g。與國標(biāo)法相比，應(yīng)用多重PCR在200份樣品檢測(cè)中無假陰性，假陽性低于2%。建立的多重PCR方法可作為現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)方法的有效補(bǔ)充，從而提高現(xiàn)有檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和敏感性。此外，本研究在建立了多重PCR方法的基礎(chǔ)上，通過固相化技術(shù)，構(gòu)