半乳糖功能化磁性四氧化三鐵納米顆粒的合成及其在蓖麻毒素分析中的應用.pdf

1、蓖麻毒素是一種核糖體失活蛋白，由A、B兩條鏈通過二硫鍵連接而成，其中B鏈具有半乳糖結合位點，可以介導毒素蛋白進入細胞；而A鏈是活性鏈，具有糖苷酶活性，通過水解核糖體RNA上的N-糖苷鍵使得腺嘌呤脫落導致核糖體失活，導致蛋白合成障礙，引起細胞死亡。由于蓖麻毒素具有極強的毒性、提取方法簡便，極易被恐怖分子利用，因此已被列入《禁止化學武器公約》的第一類控制清單之中。為應對蓖麻毒素的潛在威脅，建立快速的分析檢測方法具有十分重要的現(xiàn)實意義和軍用價

2、值。
　　 目前，對蓖麻毒素的分析檢測方法主要集中在兩個方向，一個是基于抗體的免疫學方法，另外一個就基于生物質譜的儀器分析方法。本課題從合成磁性Fe3O4納米顆粒入手，建立了基于半乳糖功能化磁性Fe3O4納米顆粒富集的免疫學分析檢測方法，同時還建立了基于半乳糖功能化磁性Fe3O4納米顆粒富集蓖麻毒素液相色譜三重四級桿質譜聯(lián)用儀(LC-MS/MS)的儀器分析方法?；谏鲜鰞热?，本論文分為三章：
　　 第一章簡要介紹了蓖麻毒

3、素的生化特性以及目前分析檢測研究進展，并對磁性Fe3O4的合成、穩(wěn)定性、功能化修飾以及在生物醫(yī)學中的應用做了簡單的概述。并在此基礎提出了本論文的立題依據(jù)、研究意義和研究思路。
　　 第二章建立了基于半乳糖功能化磁性Fe3O4納米顆粒檢測緩沖液和血清樣品中蓖麻毒素的分析方法。首先采用化學共沉淀法合成磁性Fe3O4納米顆粒，通過包被硅烷化試劑得到氨基化的磁性納米顆粒，再將化學修飾的半乳糖共價連接到磁性納米顆粒的表面，并對合成的磁性納

4、米顆粒進行了表征。測定結果表明所得到的磁性納米顆粒的半乳糖載量約為30μg/mg，蓖麻毒素的結合量約為29μg/mg。將獲得的磁性Fe3O4納米顆粒用于蓖麻毒素的檢測分析，結果顯示生理緩沖液樣品中的毒素在2-64 ng/mL范圍內線性良好，檢測限為2 ng/mL，而血清樣品中添加的毒素在4-64 ng/mL范圍內線性良好，檢測限為4 ng/mL。該方法檢測時間短(3小時)，血清樣品干擾小，可用于快速分析檢測樣品中所含的蓖麻毒素。

5、　　 第三章建立了基于LC-MS/MS檢測蓖麻毒素的方法。首先基于前期工作選取了蓖麻毒素胰酶酶解所產生的特異性肽段，并對其進行了篩選，選擇出用于定性、定量的肽段，對選取的肽段進行了質譜參數(shù)優(yōu)化；再在半乳糖功能化磁性Fe3O4納米顆粒的富集濃縮的基礎上將所建立的液相色譜質譜聯(lián)用技術用于蓖麻毒素的定量分析，該方法在毒素濃度為5 ng/mL-1μg/mL范圍內呈現(xiàn)良好線性關系，最低檢測限可達到2 ng/mL，這與普通酶鏈免疫分析的靈敏度相當