L-半胱氨酸對(duì)乙醛消除及細(xì)胞內(nèi)環(huán)境抗氧化研究.pdf

1、乙醛是吸煙和飲酒的共同有害產(chǎn)物。本文通過觀察乙醛對(duì)A549細(xì)胞各氧化損傷指標(biāo)、形態(tài)學(xué)以及基因表達(dá)等方面的影響，初步確定乙醛損傷A549細(xì)胞可能的作用機(jī)制;同時(shí)，觀察L-半胱氨酸預(yù)處理對(duì)乙醛所致A549細(xì)胞損傷的影響，研究其可能的作用機(jī)制。
　　本文通過建立乙醛對(duì)A549細(xì)胞的損傷模型和L-半胱氨酸對(duì)乙醛損傷A549細(xì)胞的保護(hù)模型來展開研究。采用四甲基偶氮噻唑藍(lán)比色法檢測細(xì)胞活力，酶標(biāo)儀測定（乳酸脫氫酶）LDH漏出量，硝酸還原酶法檢

2、測（一氧化氮）NO含量，硫代巴比妥酸法測定（丙二醛）MDA含量，WST-1法測定（超氧化物歧化酶）SOD活性，二硫代二硝基苯甲酸比色法測定（谷胱甘肽過氧化物酶）GSH-PX活性的變化，以觀察乙醛對(duì)A549細(xì)胞氧化/抗氧化系統(tǒng)的影響以及L-半胱氨酸對(duì)乙醛損傷A549細(xì)胞的保護(hù)作用;通過PCR技術(shù)檢測細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅱ(COⅡ)mRNA的表達(dá)，并采用掃描電鏡觀察、DAPI熒光染色法和流式細(xì)胞技術(shù)檢查細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡情況，以闡明乙醛對(duì)A

3、549細(xì)胞線粒體的損傷機(jī)制以及L-半胱氨酸對(duì)其的保護(hù)作用機(jī)制。
　　結(jié)果顯示，乙醛可造成A549細(xì)胞氧化損傷，使LDH釋放增多，NO含量和MDA含量升高，SOD、GSH-PX活力下降，與空白對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);L-半胱氨酸保護(hù)組LDH、NO、MDA含量低于乙醛組(200μmol/L)，而SOD、GSH-PX活性高于乙醛組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，并呈劑量-效應(yīng)關(guān)系;乙醛組細(xì)胞色素C氧化酶亞基

4、Ⅱ(COⅡ)mRNA的表達(dá)較空白對(duì)照組明顯減弱，而L-半胱氨酸保護(hù)組較乙醛組均有不同程度的改善;掃描電鏡觀察、DAPI熒光染色法及流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果均顯示L-半胱氨酸能有效地改善乙醛所致A549細(xì)胞的氧化損傷，降低凋亡率。
　　通過本實(shí)驗(yàn)的研究表明:L-半胱氨酸對(duì)乙醛誘導(dǎo)的A549細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用，在10-160μmol/L濃度范圍內(nèi)其保護(hù)效應(yīng)呈劑量-效應(yīng)關(guān)系;乙醛通過氧化應(yīng)激、自由基途徑誘導(dǎo)線粒體損傷和細(xì)胞色素C的釋放，引