烏賊墨提取物對白鯛的冷藏保鮮作用.pdf

1、目的：近年來，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，水產(chǎn)品年產(chǎn)量持續(xù)保持在4500×104t以上，連續(xù)15年居世界第一。水產(chǎn)品尤其是魚類，其低脂肪、低熱量、高蛋白的特點(diǎn)使其成為合理膳食結(jié)構(gòu)中不可或缺的要素。但是隨著生活水平的提高，人們對水產(chǎn)品的鮮度有了更高的要求，各種保鮮方法和保鮮劑的研究成為熱點(diǎn)。烏賊墨是一種有著諸多功能的天然活性物質(zhì)，對其黑色素和蛋白多糖復(fù)合體的功能研究已有諸多報道。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究烏賊墨多糖時發(fā)現(xiàn)烏賊墨多糖對小魷魚有一定的保鮮

2、效果。因此，本實(shí)驗(yàn)以海水魚一白鯛作為水產(chǎn)品代表，通過各項(xiàng)保鮮指標(biāo)的測定，研究烏賊墨的保鮮作用，再提取自鯛魚上的優(yōu)勢腐敗菌，探討烏賊墨對其優(yōu)勢腐敗菌的抑菌效果，并以優(yōu)勢腐敗菌為指示菌，鑒定出烏賊墨中具有抑菌活性的物質(zhì)，從而完善烏賊墨在保鮮抑菌方面的機(jī)理研究。
　　方法：1、將宰殺后的白鯛魚隨機(jī)分組，將魚塊用5種不同濃度和4種不同pH的烏賊墨分別處理，對照組用滅菌的磷酸緩沖液處理。4℃下貯存7天，每天取樣測定各項(xiàng)指標(biāo)。測定的指標(biāo)包括：

3、感官評價、細(xì)菌菌落總數(shù)、揮發(fā)性鹽基氮(TVB-N)值、K值、Ca2+-ATP酶活性。另外還對保鮮的兩個方面：抑菌和抗氧化的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測定。
　　2、用營養(yǎng)瓊脂從白鯛魚中分離純化白鯛魚肉上的細(xì)菌，觀察各個菌落的形態(tài)特征和單一菌落的細(xì)菌個體特征，并輔以適當(dāng)?shù)纳砩囼?yàn)，初步確定白鯛中的腐敗菌，再通過細(xì)菌PCR技術(shù)明確白鯛魚上的優(yōu)勢腐敗菌。
　　3、通過抑菌圈法和菌落計數(shù)法，確定烏賊墨對白鯛魚上分離出的優(yōu)勢腐敗菌的抑菌活性和最

4、小抑菌濃度。
　　4、對烏賊墨的化學(xué)成分進(jìn)行測定，確定烏賊墨的水分含量、粗蛋白含量、粗多糖含量、粗脂肪含量、灰分和鹽分的量及氨基酸和金屬元素的含量。其次用DEAE-纖維素陰離子交換色譜和凝膠過濾柱層析對烏賊墨進(jìn)行分離純化，以從白鯛魚上分離出的優(yōu)勢腐敗菌為指示菌，鑒定柱層析分離出的各種物質(zhì)是否為抑菌物質(zhì)。并用各種已知分子量的物質(zhì)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定抑菌物質(zhì)的分子量。并對此抑菌物質(zhì)進(jìn)行紫外和紅外掃描，確定此抑菌物質(zhì)為何種物質(zhì)。
　　

5、結(jié)果：1、烏賊墨對白鯛魚具有保鮮作用，其濃度越大，保鮮作用越強(qiáng)。適當(dāng)?shù)膒H值具有加強(qiáng)烏賊墨保鮮效果的作用，當(dāng)pH值為8.5時，烏賊墨的保鮮作用最強(qiáng)。另外，對烏賊墨的抑菌活性和抗氧化活性進(jìn)行的初步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，烏賊墨對白鯛魚上的混合菌有一定的抑菌作用和抗氧化作用。
　　2、從白鯛魚上分離出22組菌，多數(shù)菌菌落特征為圓形、邊緣整齊、隆起，菌落表面光滑，少數(shù)形狀不規(guī)則，邊緣不整齊，有裂紋。菌落顏色多樣化，主要為白色、淺黃、橘黃和深黃。經(jīng)過生

6、理生化試驗(yàn)和細(xì)菌菌落PCR鑒定，白鯛魚上的菌主要有5個種屬，包括氣單胞菌屬、腸桿菌屬、黃桿菌屬、芽孢桿菌屬和希瓦氏菌屬。初始菌相分析結(jié)果顯示，5個種屬中氣單胞菌數(shù)量最多，占76.77％，黃桿菌、芽孢桿菌、腸桿菌次之，所占比例分別為11.94％、7.10％、5.19％。另外還有少量的希瓦氏菌屬，約為0.03％。單胞菌屬、黃桿菌屬、芽孢桿菌屬、腸桿菌為白鯛魚上的優(yōu)勢腐敗菌。
　　3、烏賊墨對白鯛魚上的優(yōu)勢腐敗菌有抑制作用，尤其是對氣單

7、胞菌和黃桿菌作用最強(qiáng)。當(dāng)烏賊墨的pH值調(diào)到8.5時，烏賊墨的抑菌活性增強(qiáng)，特別是對氣單胞菌和芽孢桿菌的抑菌作用。使用菌落計數(shù)法測定烏賊墨的最小抑菌濃度，證明烏賊墨的最小抑菌濃度為16mg/mL。
　　4、對烏賊墨的化學(xué)成分進(jìn)行檢驗(yàn)，其水分為78.93％，粗蛋白為15.52％，粗多糖0.46％，粗脂肪1.24％，灰分為16.15％，鹽分為2.89％，氨基酸共16種(必須氨基酸7種，半必需氨基酸1種)，含有豐富的Ca、K、Mg、Na、

8、S、P等常量礦物元素，及微量的Al、Cr、Cu、Fe、Mn、Zn等微量元素。此外，對烏賊墨中的抑菌成分進(jìn)行分離鑒定，證明烏賊墨中的抑菌成分分子量為83，589Da，紫外光譜發(fā)現(xiàn)，抑菌物質(zhì)的多糖有強(qiáng)的多糖吸收峰，蛋白吸收峰較弱。紅外光譜也證明抑菌物質(zhì)含有多糖成分，其主要成分為肽聚糖。
　　結(jié)論：烏賊墨對白鯛魚具有保鮮作用，不僅對白鯛魚上的優(yōu)勢腐敗具有抑菌作用，其還具有抗氧化活性。實(shí)驗(yàn)證明烏賊墨中起抑菌活性的物質(zhì)為分子量為83，589