抗蛋白質非特異性吸附納米磁球的制備及其在免疫檢測中的應用.pdf

1、免疫檢測技術（Immunoassay，IA）經(jīng)幾十年發(fā)展，正逐步實現(xiàn)定量、高靈敏度、高特異性、方便快速以及經(jīng)濟實用的目標，被廣泛應用于醫(yī)學、食品、環(huán)境等檢測領域。以納米磁球作為固相載體的免疫檢測技術能夠進一步提高檢測效率、靈敏度，簡化操作和節(jié)省檢測時間。本研究希望在現(xiàn)有納米磁球免疫檢測技術的基礎上，添加抗蛋白質非特異性吸附能力，減少蛋白質在檢測過程中的干擾，提高固定抗體的生物反應活性。
　　本研究采用表面引發(fā)原子轉移自由基聚合法（

2、Surface-Initiated Atom TransferRadical Polymerization，SI-ATRP）在納米磁球表面接枝聚磺酸甜菜堿甲基丙烯酸酯(polySBMA)和聚羧酸甜菜堿甲基丙烯酸酯(polyCBMA)，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(ELISA)表征，聚合物修飾后的納米磁球具有優(yōu)秀的抗蛋白質非特異性吸附相能力（相對未修飾納米磁球的吸附值，分別為4±3％和3.25±0.21％）。通過探討polySBMA和polyC

3、BMA聚合物刷層(ploymer brush)在納米磁球表面的厚度與其抗蛋白質非特異性吸附能力的關系，再次證實納米磁球的抗蛋白質非特異性吸附能力與其表面聚合物刷層的厚度有關，且聚合物刷層過厚或過薄都不能達到理想的抗蛋白質非特異性吸附效果，其存在一個最佳膜厚范圍（polySBMA的最佳膜厚為60～70 nm，polyCBMA的最佳膜厚為24.8±1.8 nm）。
　　并進一步在polyCBMA修飾的納米磁球表面共價接枝抗β-hCG抗

4、體得到免疫納米磁球，該免疫納米磁球在表面接枝抗β-hCG抗體后仍保持接枝前的抗蛋白質非特異性吸性能（吸附相對值小于5％），對低濃度人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrop，hCG）(≤25mIU/mL)具有較低的檢測極限和很小的誤差分布。并在hCG溶液中加入胎牛血清來模擬復雜蛋白質條件，在該條件下，經(jīng)polyCBMA修飾的免疫磁球仍保持良好的檢測線性和重現(xiàn)性，且該條件下的檢測數(shù)據(jù)與未加胎牛血清的理想檢測條