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文檔簡介
1、鉛等重金屬污染對環(huán)境和人類生存造成的威脅已經(jīng)引起了政府和各界人士的廣泛關(guān)組，建立一種快速、靈敏的原位檢測方法迫在眉睫。本文的目的是通過綠色熒光蛋白標(biāo)記的方法，構(gòu)建一種微生物傳感器，對pb2+的含量進行實時原位檢測。首先利用抗性篩選法獲得了一株對高濃度(2000mg/L)pb2+具有抵抗能力的菌株，命名為FP2000，經(jīng)鑒定為克雷伯氏菌，最適的條件是：溫度37-40℃，pH值5-7。利用分子生物學(xué)手段獲得了這株菌的抗鉛基因和啟動子序列，將
2、啟動子序列zntR與EGFP融合，獲得了重組菌：BL21-pK-zntR-EGFP。該菌可以經(jīng)過pb2+離子的誘導(dǎo)，表達出EGFP蛋白，發(fā)出熒光。通過交叉試驗考察了菌懸液濃度，孵育時間等因素對其檢測結(jié)果的影響，最終獲得了檢測pb2+的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=1150.96429x-690.85714，R=0.99459，線性范圍為InM-10μM。利用這種菌作為傳感器與便攜式熒光酶標(biāo)儀結(jié)合，可以快速(20min)、高效(96樣品同時進行
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