嗜硫類磁性聚合物微球高效分離抗體.pdf

1、隨著生物技術(shù)和臨床治療的發(fā)展，對(duì)高純度、高活性IgG的需求日益增長(zhǎng)，極大的促進(jìn)了其純化工藝的發(fā)展。盡管傳統(tǒng)的沉淀法和離心過(guò)濾法已經(jīng)在IgG純化過(guò)程中大量使用，但其分離純度較低，生物活性不高，限制了其在許多領(lǐng)域廣泛利用。而色譜技術(shù)僅適合于分析檢測(cè)和小規(guī)模的分離，因此，發(fā)展新的非色譜技術(shù)，顯得非常重要。本文采用微懸浮聚合技術(shù)以醋酸乙烯酯和二乙烯基苯制備微米級(jí)的PVAc-DVB-Fe3O4磁性聚合物微球，通過(guò)偶聯(lián)恰當(dāng)?shù)奶卣髋浜匣?，?shí)現(xiàn)磁性聚合

2、物微球?qū)θ梭w免疫球蛋白G(IgG)的特異性分離。利用磁分離技術(shù)，直接從人血清中分離、純化人體免疫球蛋白G。在分離過(guò)程中，主要討論了血清與磁性微球的比例、吸附溶液和解吸附溶液的pH值、解吸附溶液的離子強(qiáng)度變化、吸附和解吸附的時(shí)間變化、吸附的溫度等因素對(duì)分離的影響，進(jìn)一步探討了特異性吸附的作用方式，并通過(guò)高效液相排阻色譜法(HPSEC)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)測(cè)定蛋白法等分別進(jìn)行了定性和定量分析，證明了此方法的可行性與可靠性

3、。主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴用化學(xué)共沉淀法制備了超順磁性、表面親油性的Fe3O4納米磁流體；通過(guò)微懸浮聚合法實(shí)現(xiàn)Vac和DVB單體對(duì)磁粒子的有效包裹，制備了平均粒徑為5.68mm的分散均勻的磁性聚合物微球，主要粒徑分布在1-10.5μm之間，其磁含量為25％，飽和磁強(qiáng)度達(dá)到17.1emu/g，且無(wú)剩磁。
　　 ⑵磁性聚合物微球表面有酯官能團(tuán)(-OOC2H5)，通過(guò)水解反應(yīng)在其表面生成豐富的羥基，通過(guò)Michael加成反

4、應(yīng)，在其表面用二乙烯基砜活化，再在其表面修飾配基(5-甲基-2-巰基-1,3,4-噻二唑和2-巰基苯并咪唑-5-磺酸鈉二水合物)，制備嗜硫性磁性聚合物微球，實(shí)現(xiàn)嗜硫磁性聚合物微球?qū)θ梭w免疫球蛋白G(IgG)的特異性分離。
　　 ⑶研究了5-甲基-2-巰基-1,3,4-噻二唑配基修飾的嗜硫磁球分離血清的各種影響因素，結(jié)果表明較佳的分離條件為：吸附緩沖液的pH值為6.0；血清量是0.7mL/g；吸附溫度宜在室溫(廈門，三月份，25℃

5、左右)下；吸附時(shí)間選擇30min；解吸附溶液為1.0 mol/LNaCl溶液。
　　 ⑷研究了2-巰基苯并咪唑-5-磺酸鈉二水合物配基修飾的嗜硫磁球分離血清的各種影響因素，結(jié)果表明較佳的分離條件是：吸附緩沖液的pH值為6.0；血清量是0.5mL/g；吸附溫度宜在室溫(廈門，三月份，25℃左右)下；吸附時(shí)間選擇40min；解吸附溶液為0.2 mol/L(NH4)2SO4溶液。
　　 ⑸這種磁性聚合物微球從血清中分離抗體，表