冬凌草種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)規(guī)程的研究.pdf

1、　　目的：通過(guò)對(duì)冬凌草種子的檢驗(yàn)規(guī)程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、真實(shí)性以及致病菌等方面的研究,為冬凌草種子的檢驗(yàn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考依據(jù)。
　　方法：通過(guò)對(duì)千粒重、發(fā)芽率、含水量、生活力等常規(guī)指標(biāo)的不同檢測(cè)條件及檢測(cè)方法進(jìn)行對(duì)比分析,找出適合冬凌草種子的檢驗(yàn)方法。
　　對(duì)不同產(chǎn)地的40份冬凌草種子的凈度、千粒重、發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、含水量、生活力及帶菌率等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。采用 SPSS17.0 分析軟件對(duì)各檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,得出劃分等級(jí)的

2、主要指標(biāo)并制定出冬凌草種子質(zhì)量的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。
　　分別采用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及高效液相色譜法(HPLC)對(duì)不同地區(qū)的冬凌草種子進(jìn)行分析,找出冬凌草種子的特征圖譜,以用于冬凌草種子的真實(shí)性判斷。
　　運(yùn)用不同培養(yǎng)基及不同處理方法對(duì)冬淩草種子內(nèi)、外部帶菌情況進(jìn)行檢測(cè),選出合適的健康度檢測(cè)方法,并找出影響冬凌草種子發(fā)芽的主要菌種。
　　對(duì)不同貯藏年限的冬凌草種子進(jìn)行發(fā)芽率、千粒重、生活

3、力、可溶性蛋白含量測(cè)定(采用考馬斯亮藍(lán)G—250染色法)、過(guò)氧化物酶活性測(cè)定(采用愈創(chuàng)木酚法)、丙二醛含量測(cè)定(采用硫代巴比妥法),進(jìn)而比較不同貯藏年限的冬凌草種子生理指標(biāo)變化對(duì)種子質(zhì)量的影響。
　　結(jié)果及結(jié)論：
　　1. 制定出冬凌草種子檢驗(yàn)規(guī)程。
　　2. 通過(guò)分析得出發(fā)芽率為冬凌草種子質(zhì)量分級(jí)的主要指標(biāo),發(fā)芽勢(shì)和千粒重為質(zhì)量分級(jí)的重要參考指標(biāo)。將冬凌草種子的質(zhì)量分為三級(jí),一級(jí)種子發(fā)芽率不低于89%,發(fā)芽勢(shì)不

4、低于81%,千粒重不低于0.56g；二級(jí)種子發(fā)芽率為78%~89%,發(fā)芽勢(shì)為70%~81%,千粒重為0.53 g~0.56 g；三級(jí)種子發(fā)芽率為71%~78%,發(fā)芽勢(shì)為57%~70%,千粒重為0.52g~0.53 g。
　　3. 由電泳圖譜可知,冬凌草種子可溶性蛋白條帶豐富,不同地區(qū)的冬凌草種子可溶性蛋白條帶的相似度極高,共得到18條共有譜帶；通過(guò)采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版》軟件對(duì)冬凌草種子的高效液相特征圖譜的相關(guān)

5、參數(shù)進(jìn)行自動(dòng)匹配可得共有特征峰6個(gè),其中5號(hào)峰為冬凌草甲素色譜峰。
　　通過(guò)對(duì)兩種指紋圖譜結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)：兩種指紋圖譜技術(shù)結(jié)果都比較直觀、穩(wěn)定,但各自單獨(dú)應(yīng)用于冬凌草種子真實(shí)性的檢測(cè)又各有薄弱之處。HPLC法冬凌草甲素峰的位置很明確,但特征峰數(shù)相對(duì)較少；SDS-PAGE 凝膠電泳法中各個(gè)樣本一致性條帶較多,但蛋白條帶與冬凌草種子本身所具有特征化學(xué)成分之間的關(guān)系不甚明確,因此,可考慮采用兩種方法相結(jié)合的檢測(cè)方式最終確定種子的

6、真實(shí)性。
　　4. 確定冬淩草種子健康度檢查的最佳方法為：直接涂布培養(yǎng)法(外部菌檢測(cè)法)和瓊脂平皿法(內(nèi)部菌檢測(cè)法)。通過(guò)致病菌鑒定發(fā)現(xiàn),鏈格孢屬真菌對(duì)冬淩草種子正常萌發(fā)影響較大且出現(xiàn)頻率最高。因此,將鏈格孢屬真菌作為影響冬凌草種子的主要菌種。
　　5. 通過(guò)對(duì)冬凌草種子千粒重、發(fā)芽率、生活力等常規(guī)指標(biāo)的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：隨著貯藏年限的延長(zhǎng),各常規(guī)指標(biāo)均呈下降趨勢(shì)；種子活力與可溶性蛋白含量,POD酶含量呈正相關(guān),與 MDA 含量