小鼠Arfip2基因的印記及其表達(dá)的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)室利用兩種預(yù)測模型在全基因組范圍內(nèi)進(jìn)行候選印記基因篩選，得到若干候選基因，本課題所研究的基因 Arfip2就是其中之一。該基因的以往研究多集中于其蛋白的功能，對該基因表達(dá)模式的研究還未見報(bào)道。本課題對Arfip2蛋白進(jìn)行了生物信息學(xué)分析后，重點(diǎn)分析了該基因在小鼠胚胎發(fā)育中后期的表達(dá)模式，并對該基因的印記狀態(tài)和調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了初步研究，為進(jìn)一步研究該基因的表達(dá)模式奠定了基礎(chǔ)。
　　生物信息學(xué)分析表明，該基因位于小鼠7號染色體上，

2、基因全長6.2kb，其編碼蛋白為 ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2，屬于Arfaptin家族。該基因是一個(gè)進(jìn)化保守的基因，其蛋白功能域結(jié)構(gòu)和BAR結(jié)構(gòu)域十分類似。本課題利用基于 SNP的直接測序法分析了Arfip2基因的印記狀態(tài)，結(jié)果顯示在小鼠E15.5天胚胎的主要組織（腦、舌、心臟、肺臟、肝臟、腎臟、胎盤）中，該基因呈現(xiàn)出雙等位表達(dá)的模式。之后，我們利用原位雜交和實(shí)時(shí)定量 PCR技術(shù)詳細(xì)研究了在小鼠胚胎發(fā)育中后期Arfip2基因的表達(dá)模式

3、。結(jié)果顯示，該基因在 E9.5~E11.5天的胚胎中特異地只在腦中表達(dá)，其表達(dá)主要分布在端腦、中腦、菱腦。在 E12.5天的胚胎中，Arfip2基因表現(xiàn)出廣泛表達(dá)的模式。在E12.5天的腦、舌、肝臟中檢測到該基因強(qiáng)烈的表達(dá)信號，在心臟、肺臟、腎臟中的信號則相對較弱。在 E15.5天的胚胎中，Arfip2的表達(dá)廣泛分布在腦、舌、肺臟、肝臟、腎臟和胸腺等組織中，而在心臟中的表達(dá)依然很低。定量PCR結(jié)果顯示，在小鼠胚胎發(fā)育后期 Arfip2基