灰樹花在米糠培養(yǎng)基中液態(tài)培養(yǎng)產(chǎn)多糖和富集有機(jī)硒的研究.pdf

1、灰樹花是已經(jīng)引起研究人員重視的一種珍稀食藥兩用真菌?；覙浠ǘ嗵强梢暂o助抗腫瘤治療、具有增強(qiáng)人體免疫功能等作用。經(jīng)食用菌等生物轉(zhuǎn)化后的硒也具有毒性小、可提高人體免疫力的功效。米糠是稻米加工過(guò)程中的副產(chǎn)品，產(chǎn)量大，有待進(jìn)行深層次的轉(zhuǎn)化，以提升其價(jià)值。本研究中，采用食用菌灰樹花在米糠培養(yǎng)基中液體培養(yǎng)產(chǎn)灰樹花多糖和富集有機(jī)硒，可以將灰樹花多糖、有機(jī)硒生產(chǎn)和深度轉(zhuǎn)化使用米糠的要求集合到一起加以解決，從而形成新的思路，產(chǎn)生新的工藝，得到新的結(jié)果，并

2、為大規(guī)模利用廉價(jià)原料、工業(yè)化生產(chǎn)特定的保健食品奠定基礎(chǔ)，因此，本研究有一定的理論和實(shí)用價(jià)值。
　　 本研究包括的主要內(nèi)容如下：
　　 (1)研究了灰樹花在米糠為主要成分的培養(yǎng)基上液體發(fā)酵產(chǎn)多糖的可能性、米糠使用方式和米糠培養(yǎng)基的組成。采用菌種是實(shí)驗(yàn)室經(jīng)紫外誘變挑選的灰樹花米糠培養(yǎng)基適性菌種。配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基：馬鈴薯(一次煮出液）200g/L，磷酸二氫鉀1.5g/L，硫酸鎂0.75g/L，維生素B110mg/L。從基礎(chǔ)培養(yǎng)基

3、出發(fā)，分別進(jìn)行了不同碳源、不同氮源、葡萄糖添加量(0.5～2，5％)、米糠添加量(1～5%(wt)）等的單因素試驗(yàn)，選擇葡萄糖添加量(1～2%)、米糠添加量(4～6%)和蛋白胨添加量(0.3～0.5%)三個(gè)因素進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，并以灰樹花菌絲于重和多糖含量作為考察指標(biāo)。得到了灰樹花液態(tài)發(fā)酵過(guò)程中在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中最優(yōu)的額外添加物和量分別為：米糠40～60g/L、葡萄糖15g/L、蛋白胨3～4g/L。得到菌絲多糖為281.3mg/10

4、0mL，菌絲的平均產(chǎn)量值為1246.7mg/100mL。試驗(yàn)結(jié)果表明可以米糠作為主要培養(yǎng)基成分替代或少用葡萄糖等碳源，以降低成本?；A(chǔ)培養(yǎng)基中可以不加馬鈴薯。米糠的各種使用方式對(duì)菌絲多糖影響不是很大。
　　 (2)研究了灰樹花在優(yōu)化的米糠為主要成分的培養(yǎng)基上液體發(fā)酵產(chǎn)多糖的外部條件。分別對(duì)不同接種量(4～12mL)、裝樣量(50～150mL)、培養(yǎng)時(shí)間(3～8d)、培養(yǎng)溫度(22～34℃)、搖床轉(zhuǎn)速(90～210r/min)這五

5、個(gè)影響因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，并以灰樹花菌絲干重和菌絲多糖含量作為考察指標(biāo)。獲得了灰樹花液體培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)時(shí)間為5d，培養(yǎng)溫度為28℃左右，搖床轉(zhuǎn)速為120～150r/min，接種量為8%，裝樣量為20%（250mL錐形瓶）。
　　 (3)研究了灰樹花在米糠為主要成分的培養(yǎng)基上液體發(fā)酵同時(shí)富集有機(jī)硒和產(chǎn)多糖的作用。通過(guò)不同濃度的硒添加量進(jìn)行硒的單因素試驗(yàn)。按照U12*(1210)均勻設(shè)計(jì)方法進(jìn)行了試驗(yàn)，考察硒X1、米糠X

6、2、葡萄糖X3及米糠處理方式X4與菌絲生長(zhǎng)量、菌絲多糖含量、有機(jī)硒富集量的關(guān)系，利用SPSS軟件對(duì)均勻試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回歸分析。對(duì)均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果分別采用多元線性回歸和二次多項(xiàng)式回歸，獲得菌絲干重Y1、多糖含量Y2、硒含量Y3、富硒率Y4的回歸方程分別為：Y1=0.070X2+0.234X3+0.209;Y2=0.024X2+0.087X3+0.046;Y3=0.034X1X3-0.009X4+0.118;Y4=0.003X2+0.559X

7、1X3-0.006X2X3+0.022。
　　 (4)在18L發(fā)酵罐上進(jìn)行擴(kuò)大試驗(yàn)。在發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基上，裝樣量為15L，發(fā)酵溫度28±1℃，通氣量0.8v/v/min，攪拌速度150r/min，罐表壓0.05MPa的條件下，發(fā)酵培養(yǎng)5d。在發(fā)酵時(shí)間為2d左右時(shí)，菌絲體粗多糖含量達(dá)到最大值，為631mg/100mL。同時(shí)得到了灰樹花在米糠為主的培養(yǎng)基上富集硒和同時(shí)生產(chǎn)多糖放大試驗(yàn)的代謝過(guò)程，為制定放大生產(chǎn)時(shí)的參數(shù)和控制指標(biāo)奠定了理

8、論基礎(chǔ)。
　　 (5)對(duì)灰樹花菌絲體多糖的提取工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化研究，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)考慮交互作用的正交試驗(yàn)L16(215)，通過(guò)極差和方差分析，獲得提取菌絲體多糖的最佳試驗(yàn)條件為：提取時(shí)間為90min、提取溫度為75℃、提取次數(shù)為2次、乙醇濃度為67v/v。
　　 (6)對(duì)粗多糖進(jìn)行了DEAE-52纖維素層析純化和性質(zhì)分析。獲得三個(gè)純多糖組分，對(duì)純多糖組分進(jìn)行理化性質(zhì)分析，由分析結(jié)果可知所得樣品確為多糖樣品，